[KSS17]

Здравствуйте!

...оффтоп для темы, за сутки 2 раз слышу от разных людей, что каннабис не идет на ВЭЖХ...почему? мала концентрация?

Речь о разных понятиях... В ХТА и СХ определяют чаще основной метаболит ТГК, т.к. нативные каннабиноиды в мизерных концентрациях обычно. При этом зовут так же как и в криминалистике - определение каннабиноидов.
Есть ВЭЖХ определение метаболитов, но с потенциометрическим детектором (Юджи Накахара, год не помню). Да я бы без МС-детектора даже не пытался этого делать, т.к. что ГХ-ПИД (ТИД), ВЭЖХ-УФ всегда оставляют долю сомнения в полученном результате...

[Korvet]

Да, я понимаю что речь идет о метаболите, ТГК-СООН, насколько я помню. "каннабис" я для краткости написал. вроде бы ТГК-СООН, тоже должен иметь неплохие характеристики для ВЭЖХ-УФ, наверное проблема с выделением?

[chemist-sib]

...ТГК-СООН... наверное проблема с выделением?

Вот с этим-то - проблем нет. Ее даже для ТСХ хватает, в моче у курильщиков. Мягкий щелочной гидролиз, простая экстракция. "Держится" больно хорошо, и "поглощает" плохо...

[Korvet]

ясно, спасибо!

[Deminolog]

Korvet, спасибо Нет, не преподаю, просто сам косячил сильно сначала, не хочу чтобы другие тоже шли через те же ошибки
ВЭЖХ-МС - наиболее распространенный способ определения каннабиноидов, однако если мне память не изменяет, это один из немногих типов НС, которые определяют с регистрацией отрицательных ионов при электроспрейной ионизации. Все остальное, что приходит в голову, регистрируется в ESI+ (но всегда помните, что нужно учитывать не только возможность образования [M+H], но и различных вариаций типа [M+Na+H], так что очень важно, какие у Вас будет вода (мы используем деионизат, который прогоняем потом через Milli-Q) и другие компоненты ПФ по ионному составу, а также куски от растворителя. Более подробно описано все в Лебедеве). Метаболиты также для многих соединений регистрируется в ESI+, но всегда есть исключения, не забываем об этом. Попробовать на ВЭЖХ каннабиноиды можно, почему нет? Попробую, как избавлюсь от пары дел, но попробую на ВЭЖХ-УФ-МС, дабы анализ был надежным. Насчет удерживания - вопрос можно решить сменой колонки. С18 - не для всего годится, как ни крути. Мне давно уже интересно, как будут себя вести некоторые соединения на HILIC-сорбенте (книжки и статьи это хорошо, но пока сам не поработал - не чувствую всех плюсов и минусов) и на монолитных колонках С18 (их прелесть в том, что можно работать на больших потоках и с малыми давлениями, существенный минус - если колонка забьется - её почти невозможно привести в чувство. И предколонка тут не спасет, поскольку помимо физических причин типа грязи бывают и химические, например, необратимая сорбция. При этом первой умирает предколонка, поскольку её емкость не такая уж и большая, следом начинает забиваться сорбент. Обычно это сопровождается повышением давления в колонке, но если у Вас будет стоять рутина - колонка может умереть во время серии, да так, что заметите уже слишком поздно, увы). К сожалению, проверю на разных сорбентах только летом (спасибо "любимому" ФЗ 94 и срокам поставки оборудования). В принципе, не важно, какой прибор, если есть удерживание на сорбенте или его нет - оно будет на типе сорбента, поэтому вполне может оказаться, что для определенных целей Вам будет лучше заказывать разные сорбенты, пусть и для милихрома. Набить колонку Вам могут любым сорбентом, все зависит только от пожелания.
Уважаемый KSS17, потенциометрические детекторы были популярны в 80-х годах, однако у них есть одна большая болезнь - долго регенерировать. Поэтому даже если пишут, что анализ экспрессный - я всегда сомневаюсь в этом. Стоит электрохимический детектор, Decade II, не пользуюсь именно по этой причине. Мне больше интересно, можно ли использовать флюориметр... Великолепная чувствительность) Тоже надо будет проверить...
essenciya, не переживайте и не расстраивайтесь. Выше KSS17 описывал очень хороший вариант для милихрома - фракционирование предварительное. Это хороший способ, чтобы облегчить решение многих задач, с которыми Вы столкнетесь. Тем более прибор покупается не на всю жизнь, несмотря на то, что при должном уходе он будет служить Вам верой и правдой более 10 лет.

[Deminolog]

Сделал каннабис на ВЭЖХ. Не понял, почему ГХ более распространен. Скорее всего благодаря простому и понятному методу внутреннего стандарта. Осталось разобраться с порядком элюирования. Каннабиноиды прошли по ESI+, несмотря на то, что я видел своими глазами данные, где их в ESI- гоняли. Хотя для некоторых соединений норма иметь и позитив, и негатив. Например, ДжиВиАшки отзываются и там, и там... Данные в обработке... Реально методику поставить и на милихром, она проста до безобразия просто.
Интересный факт. Все Вы прекрасно знаете о методических рекомендациях для определения наркотических средств, получаемых из конопли и мака под редакцией уважаемого профессора Бабаяна. Так вот, у/з показал более высокую степень извлечения каннабиноидов, нежели нагрев до кипячения. Хочу теперь после кипячения проанализировать экстракт, посмотреть, в каких компонентах разница и насколько. Спасибо ВЭЖХ-МС и ГХ-МС, буду нормировать площади и считать их отношения. Но это стоит делать в СИМе, думаю, чтобы значение СКО было малым...



Сообщение отредактировал KSS17 - 2.04.2012 - 18:25

[Korvet]

Вообще ВЭЖХ каннабиноидов (не метаболитов) уже было поставлено на ВЭЖХ как методика ЭКЦ МВД. Есть какая-то книжечка Камаев кажется автор. Конец 90-ых. Я думаю что Бабаян наверное про УЗ и не слышал, когда писал про "травы" уж больно давно это было! а так, да, УЗ конечно лучше. Но есть еще один момент. сушка сырья перед экстракцией. надо непременно высушить при 110-115. тогда ТГК будет больше за счет того что в него перейдет часть ТГК-кислоты. (за что купил за то и продаю, так написано в ООН-овской методичке).

[Deminolog]

Да, пробы желательно в любом случае сушить, особенно если это растение... Постоянная влажность должна быть, иначе результат количественной оценки можно запросто отметать, он не будет соответствовать действительности...
Камаев - знакомый автор Как-то не додумался его методичку еще поднять Сейчас гляну
А вот насчет метаболитов - я проверить и сказать что-то не смогу, увы Постараемся выйти на наркодиспансер, может смогу убедить принять участие в работе (образцы поставлять, остальное я сам все сделаю).

[Deminolog]

Выложу пока что только одну картинку... Пока что вопросов больше, чем ответов...
исходя из литературных данных и данных ГХ-МС в конопле мы имеем целый набор каннабиноидов. Естественно, что ГХ-МС более чувствителен, хотя бы потому что газ-носитель у меня чистый, а вот на ВЭЖХ-МС чистота растворителей не MS-grade. Как итог - имеем большой фоновый сигнал, а также аддукты в виду М+натрий, М+ацетонитрил+натрий... Да и по совести - должно было делать в метаноле, во избежание подавления ионизации. Но по ряду причин взял ацетонитрил. Как итог: имею 3 пика (на самом деле есть подозрение на 4, но уж больно мала интенсивность - как раз в три раза выше шума, но я почти уверен, что это ТГК-СООН. Сильно удерживается, зараза. И много его быть не должно после сушки сырья) с массой 315, что соответствует М+Н для ТГК, каннабидиола (эти однозначно), а вот дальше начинаются сомнения. Есть публикация, в которой указывается, что 315 ион способен дать еще CBD-COOH, и ТГК-СООН. Но на хроматограмме я вижу каннабихром, полученной на ГХ-МС. Каннабихром ТАКЖЕ по его массе должен будет дать 315 ион! 311 ион - синий - каннабинол, это совсем просто. Время удерживание большое по одной простой причине - для скрининга я выдерживаю условия для JWH и некоторых других соединений (кстати, с ними тоже интересная петрушка получается. Я ожидал от них наиболее интенсивных М+Н ионов, а это оказалось не всегда, даже на ESI! Совсем неожиданно, должен сказать. Без ГХ-МС и экстракта с одним веществом - не решился бы утверждать что-то, честно говоря).
Картинку прикрепляю, может кому-нибудь будет интересно посмотреть За полосу возле пиков простите, только что сам увидел - это курсор на экране был

Сообщение отредактировал Deminolog - 3.04.2012 - 13:25

[Korvet]

а чего-то у меня картинка не открывается...

а есть возможность препаративно фракции выделить и на гх-мс?а так блуждание по тьмам все равно, хоть и ВЭЖХ-мс...IMHO

[Deminolog]

Попробую вколю 10 мкл на другую колонку (аналогичная, но немного подсаженная уже, но там эффективности тоже с головой хватит, а новую Luna C18 (2) немного жаль, на неё колю по 0,5-1 мкл, больше просто не требуется). В данном случае - действительно больше гадание, поскольку два противоречащих источника получаются
Картинку завтра с прибора уже не PNG, а JPEG сделаю, и либо архивом залью, либо опять же так же загружу, но перепроверю, чтобы она нормально открывалась. Ну и попробую еще в SIM снять, если увижу еще 5 соединение - будет вообще шикарно

[Deminolog]

Посидел чуток, разобрался Все правильно и хорошо ТГК-СООН в ESI+ должен иметь другую массу. Это в APCI его такой получили, что, кстати, тоже странно, но ладно, с APCI еще не работал.
Так что все пока что правильно и хорошо получается...

[Deminolog]

Стою на асфальте в лыжи обутый... Товарищи, подскажите, сижу и думаю, 4 пика 315 массы... Есть нехорошая мысль, что там [CBD(-COOH)+H] и [THC(-COOH)+H]. Но ведь по логике практически весь ТГК-СООН как и CBD-СООН должны были при сушке уйти... А там довольно интенсивные, чтоб их, пики! Каким образом можно детектировать на ГХ наличие ТГК-СООН? Я так понимаю, кислотные формы на ГХ определяют, но ведь основной метаболит именно ТГК-СООН же.... Сейчас подниму хроматограмму деравитизрованной конопли, но что-то странно, подозреваю, что это именно они...

[Korvet]

а разве метаболит ТГК-СООН и растительная ТГК-кислота - одно лицо? ведь нет же!

и смотря при какой сушке!

[Deminolog]

Разные, туплю, прошу прощения
Сушил при 70 градусах по методике ООН... Подозреваю, что все-таки декарбоксилизация происходит...