[KSS17]

Исследования по разработке методов анализа некоторых β–адреноблокаторов в биологических объектах



Категория: Авторефераты диссертаций
Библиографическое описание:
Кокорина Наталья Олеговна
Аннотация:
Кокорина Н.О. Исследования по разработке методов анализа некоторых β–адреноблокаторов в биологических объектах / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук, 14.00.02. - «Фармацевтическая химия, фармакогнозия». - Самара, 2013. - 24 с.
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объектам и методам исследований, собственных исследований, выводов, а также списка литературы, включающего 189 наименований, в т.ч. 34 источника иностранных авторов. Работа изложена на 110 страницах машинописного текста, включает 30 таблиц, 8 рисунков и 5 приложений, включающих 2 таблицы и 9 рисунков.
Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, показана научная новизна и практическая значимость полученных результатов, изложены положения, выносимые на защиту.
В первой главе (обзор литературы) приведен аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по современным методам извлечения исследуемых β–адреноблокаторов из биологического материала и их анализа.
Во второй главе представлена характеристика объектов и методов исследования. Приведены системы растворителей и элюентов для исследования методами ТСХ и ВЭЖХ, условия проведения исследований методом ВЭЖХ.
В третьей главе (экспериментальная часть) приведены результаты исследования β–адреноблокаторов методом ТСХ и методом ВЭЖХ:
- описаны модельные растворы β–адреноблокаторов, используемые для этих целей;
- приведены результаты исследований по подбору систем растворителей для разделения и идентификации исследуемой группы веществ в индивидуальном виде и в смеси;
- приведены результаты исследований по подбору хромогенных реактивов для идентификации исследуемых β–адреноблокаторов;
- определены хроматографические характеристики и установлены пределы обнаружения β–адреноблокаторов при анализе методом ТСХ и ВЭЖХ;
- приведена методика количественного определения исследуемых β–адреноблокаторов методом ВЭЖХ, построены калибровочные графики;
- приведены результаты исследований по жидкость-жидкостной экстракции (подбор растворителей, их соотношение, pH среды, влияние разбавления и очистки биологических жидкостей) исследуемых β–адреноблокаторов из водных растворов и биологических жидкостей (кровь, моча), приведены результаты валидации методики количественного определения.
- предложены схемы определения исследуемых β–адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) в биологических жидкостях (крови и моче) при судебно-химическом и токсикологическом исследованиях.
Диссертация завершается общими выводами по работе, списком литературы и приложениями. В приложениях приведены результаты применения разработанной методики извлечения, идентификации и количественного определения β–адреноблокаторов в практике судебно-химического отделения ГБУЗ НСО «Новосибирское областное бюро судебно-медицинской экспертизы».
Научный руководитель: Ханина Миниса Абдуллаевна - доктор фармацевтических наук, профессор. Официальные оппоненты: Кудашкина Наталья Владимировна - доктор фармацевтических наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, заведующая кафедрой; Гурьев Артем Михайлович – доктор фармацевтических наук, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Центр внедрения технологий, руководитель.
Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Актуальность темы
В настоящее время в практике судебной медицины и токсикологии встречаются случаи отравления β-адреноблокаторами лиц различных возрастных групп. Наиболее часто встречаются отравления метопрололом, атенололом, пропранололом, бисопрололом, талинололом, бетаксололом (Ходасевич А.П., Вольграм Е.Н., 1983; Анохин В.Т. с соавторами, 1983; Belson, M.G., Geller, R.S., 2000; Кутяков В.А., 2006; Семьянов с соавторами, 2007; Кнауб В.А., 2009; Лагуткина Т.П. с соавторами, 2011).
Используемые в судебной химии и токсикологии методики не позволяют однозначно идентифицировать β-адреноблокаторы, поскольку в литературе в основном описаны методики обнаружения отдельных β–адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) методом тонкослойной хроматографией (ТСХ), где в качестве проявляющих реагентов используются йодсодержащие реактивы. Кроме того, информация по идентификации β–адреноблокаторов при их совместном присутствии ограничена, а проявители (йодсодержащие реагенты), используемые для их проявления, не позволяют однозначно интерпретировать полученные результаты, так как окрашивают все азотсодержащие вещества в оранжевый или коричневый цвет.
Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектированием позволяет идентифицировать многие лекарственные вещества, имеющие поглощение в области УФ-спектра, в том числе и β–
адреноблокаторы (Барам Г.И. с соавторами, 2002; 2003; 2005; Федорова Г.А., Кожанова Л.А., 2007). Однако применение метода ВЭЖХ ограничивается отсутствием в практике судебной химии и токсикологической химии
оптимальных методик пробоподготовки биологических объектов (оптимальные условия для высокой степени излечения β–адреноблокаторов), обеспечивающих наилучшую эффективность экстракции и характеризующиеся невысокой трудоемкостью.
В случае летальных исходов при судебно-химических исследованиях и острых отравлениях наиболее удобными объектами исследования являются кровь и моча. Поэтому разработка надежных и достоверных методик изолирования β–адреноблокаторов из крови и мочи, их идентификации и количественного определения является актуальной проблемой.
Цель работы и основные задачи исследования
Целью настоящего исследования является разработка эффективной методики выделения β–адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) из биологических объектов (кровь и моча), их идентификации и количественного определения.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
- разработка методик извлечения, обеспечивающих эффективную экстракцию β–адреноблокаторов из биологических жидкостей;
- подбор чувствительных цветных реакций при анализе методом тонкослойной хроматографии для идентификации атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола;
- подбор хроматографических систем, позволяющих разделять и идентифицировать β–адреноблокаторы методом ТСХ;
- разработка оптимальных условий метода ВЭЖХ, определение хроматографических характеристик (время удерживания, спектральные отношения) для идентификации исследуемых β–адреноблокаторов.
- разработка методики количественного определения атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола в биологических объектах (крови и моче) методом ВЭЖХ.
- апробирование разработанных методик на образцах биологического материала, полученного для судебно-медицинского и токсикологического исследования в работе ГБУЗ НСО «Новосибирское областное бюро судебно-медицинской экспертизы».
ВЫВОДЫ
1. Оптимальные условия извлечения методом жидкость-жидкостной экстракции из биологических жидкостей (крови, мочи) бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола - смесь растворителей хлороформ-спирт изопропиловый в соотношении (9:1) при рН среды 11 – 12, атенолола - смесь растворителей хлороформ – спирт изопропиловый в соотношении (3:2) при рН среды 11 - 12.
2. Установлено, что разбавление биологических жидкостей (крови, мочи) водой очищенной в соотношении (1:1) перед экстрагированием увеличивает процент извлечения исследуемых веществ из крови на 8,5 – 12,5 %, из мочи – на 14 – 20%.
3. В предложенных условиях жидкость-жидкостной экстракции β-адреноблокаторов из мочи извлекается бетаксолола 83,3±1,9%, бисопролола 82,4±2,0%, метопролола 88,2±2,0%, пропранолола 84,9±1,6%, талинолола 84,9±1,9%, из крови бетаксолола 81,9±1,9%, бисопролола 80,3±1,8%, метопролола 87,1±2,1%, пропранолола 84,5±1,6%, талинолола 84,1±2,0%, атенолола извлекается из мочи до 64%, из крови до 55%.
4. Установлено, что при очистке биологических жидкостей (крови, мочи) гексаном от сопутствующих веществ из мочи перед извлечением β-адреноблокаторов теряется бетаксолола до 16%, метопролола до 2% и пропранолола до 35,8%, из крови - бетаксолола до 5,2%, метопролола - до 1% и пропранолола - до 1,4%,. Атенолол, бисопролол и талинолол гексаном не извлекаются.
5. Разработана методика ТСХ для разделения и идентификации β-адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) в индивидуальном виде и в смеси. Подобраны системы растворителей и хромогенные проявители, определены значения Rf для каждого вещества.
6. Подобраны условия для качественного и количественного анализа β-адреноблокаторов в биологических жидкостях (крови, мочи) методом ВЭЖХ: элюент А 0,1% раствор кислоты трифторуксусной, элюент В–ацетонитрил (класс 0 или 1), многоволновое фотометрирование в УФ-области спектра при длинах волн 210 (базовая), 220, 230, 240, 250, 260, 280 и 300 нм, градиентный режим анализа: градиент ацетонитрила (элюента В) от 2 до 100% за 3000 мкл.
7. Определены хроматографические характеристики (времена удерживания и спектральные отношения) для идентификации β-адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) методом ВЭЖХ.
8. Установлены пределы обнаружения исследуемых β-адреноблокаторов методом ВЭЖХ (г. в пробе): для атенолола 1,1 х 10-9, для бетаксолола 2,0 х 10-9, для бисопролола 1,9 х 10-9, для метопролола 0,5 х 10-9, для пропранолола 0,9 х 10-9, для талинолола 1,1 х 10-9.
9. Разработаны методики количественного определения β-адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) в биологических жидкостях (крови, моче) методом ВЭЖХ при концентрации вещества в пробе в интервале 0,5 – 10 мкг/мл.
10. Проведена валидация разработанной методика по показателям: линейность результатов, правильность, повторяемость и воспроизводимость.
11. Разработаны алгоритмы судебно-химического (токсикологического) исследования биологических жидкостей (крови и мочи) для качественного и количественного анализа β-адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола).
12. Разработанная методика качественного и количественного определения β-адреноблокаторов (атенолола, бетаксолола, бисопролола, метопролола, пропранолола и талинолола) используется в работе судебно-химического отделения ГБУЗ НСО «Новосибирское областное бюро судебно-медицинской экспертизы».

Подробнее