[Гермиона]

Уважаемые коллеги!
Около года назад в нашу лабораторию приобрели новый Agilent (7890А/5975С с автосамплером на 16 образцов). Работаем, когда образцов сравнительно немного - ручной метод ввода, когда "завал" - оставляем на ночь на автосамплере, на следующий день расшифровываем хроматограммы.
Я обратила внимание на то, что при автоматическом вводе образцов пики получаются значительно ниже, чем при вводе вручную, при одних и тех же настройках условий ввода. Пробовала экспериментировать со скоростью ввода образца, с числом "прокачек" образца, с разными шприцами. Все-равно отклик на хроматограмме выходит значительно ниже, соответственно иногда соединения "теряются" вовсе.
Возможно, существует какая-то особенность, которую мы упускаем?

[Гермиона]

Пожалуй, правильнее будет сообщить еще и настройки нашего автосамплера:
Шприц на 10 мкл, ввод образца 2 мкл (это уже от отчаянья),
Sovent A: гексан, число промывок до ввода - 1 раз, после ввода - 4 раза,
Sovent В: этилацетат, число промывок до ввода - 1 раз, после ввода - 1 раз,
"Прокачки" образцом до ввода - 2 раза.
Скорость плунжера при промывках растворителем:
Draw 300 мкл/мин, Dispense 6000 мкл/мин (так было "по умолчанию", побоялась менять)
образцом: Draw 100 мкл/мин, Dispense 100 мкл/мин (пробовали ставить разные).
Ввод образца - со скоростью 100 мкл/мин. Viscosity Delay - 0 сек, глубина опускания иглы - 0 мм (тоже экспериментировали по разному). Вставки в виалу пробовали стеклянные с узким кончиком на 100 мкл и пластиковые с плоским дном на 400 мкл, пробовали ставить виалки открытыми, чтобы не мешало "отрицательное" давление. Количество образца в виалах (во вставке) от 50 до 100 мкл.
Режим ввода - сплитлесс. Лайнер сплит/сплитлесс с зуженной серединкой и вставкой из дезактивированной стекловаты.
Septum Purge Flow 3 мл/мин, Gas Saver 20 мл/мин после 2 мин. Давление на входе 14,8.
Ручной ввод пробовали делать тем же шприцом из автосамплера - все нормально.
Быть может, какая-то "элементарная глупость" притаилась в настройках?

Сообщение отредактировал Гермиона - 17.11.2013 - 08:10

[chemist-sib]

Гермиона, а в виале не маловат ли уровень жидкости - если по 50 мкл пробы брать? Шприц в автосемплере первые прокачки сбрасывает в слив, а набирает он полные 10 мкл. Я никогда не наливал в виалу меньше 90-100 мкл (а стандартно - 150 мкл), ибо тогда есть вероятность, что он наберет (и вколет) воздух с остатками исследуемой жидкости.

[RedPepper]

Gas Saver 20 мл/мин после 2 мин.

Перед ручным заколом необходимо вначале нажать кнопку "PrepRun", чтобы прибор вышел из режима "GasSaver" (т.е. когда стоит сброс 20:1) - при заколе автосэмплером это происходит автоматически - скорее всего, в этом и есть причина наблюдаемых различий...
Более определённо можно будет говорить, если сообщите, в каком режиме вы работаете: со сбросом или нет, если да, то с каким; какой поток газа-носителя через колонку установлен...

[Korvet]

chemist-sib, прав, может воздух забирает. чтобы со дна брал надо ставить глубину не 0, а -2. но лучше наливать больше.
второй момент заключается в том что у вас мало промывок растворителем. если шток шприца плохо смочен, он может плохо засасывать воздух, куда спешить? ставьте по 7-10 промывок. и минимум 5 раз промывку пробой.
и еще надо чтобы растворители совмещались, то есть чтобы то что Вы потом колите было хорошо растворимо с тем чем последний раз мыли шприц. у нас всегда например на промывке спирт .

ну и конечно играет большую роль как Вы колите вручную. может "пирожком", тогда оно конечно больше пробы попадает чем при автовводе, он же так не умеет.

[alexlp]

Ввод образца - со скоростью 100 мкл/мин. Viscosity Delay - 0 сек, глубина опускания иглы - 0 мм

Скорость ввода слишком мала. Используйте настройки быстрого ввода если шприц не тефлоновый. Задержку на вязкость лучше поставить 2-3 сек. Глубину опускания иглы для стандартной виалы без вставки устанавливайте -2 (минс два) мм, при этом объем пробы в виале не должен быть менее 150 мкл (200-оптимум).
Виалы обязательно закрывайте, иначе последние пробы подъиспарятся и уровень опустится ниже иглы.

Режим ввода - сплитлесс. Лайнер сплит/сплитлесс с зуженной серединкой и вставкой из дезактивированной стекловаты.

Первое - уберите стекловату и этот лайнер - он не предназначен для сплитлеса. Подойдет синглтайперед лайнер, пустой, без стекловаты. Обязательно проверьте, какой используете растворитель, т.к. у всех разный коэффициент увеличения объема. Самые неподходящие - это спирты. Они переполняют лайнер, тем более при вводе 2 мкл. Наилучший с точки зрения минимального объема паров, если память не изменяет, - хлороформ. Оптимальный на все случаи жизни - этилацетат. И объем паров невысок, и фазу смачивает нормально, образуя ровную пленку растворителя на начальном этапе ввода.
Режим ввода следует выбрать пульсед сплитлесс и перекрывать обдув прокладки на время ввода.
В новых самплерах есть прекрасная опция - сэндвичевый ввод. Очень рекомендую! Прекрасно моделирует ручной ввод.
В общем и целом автоматизированный ввод предпочтительнее во всех случаях. Если он правильно настроен. На порядок повышается воспроизводимость и качество хроматограмм. Автоматический ввод следует применять и для одиночных, и для серийных анализов.

[RedPepper]

Режим ввода - сплитлесс.

Ох... не заметил... Но вопрос остаётся - перед ручным заколом "PrepRun" на панели прибора нажимаете?

[alexlp]

Вот вариант настроек для сэндвичного ввода в режиме сплитлесс для 7890 с тефлоновым шприцем. Если поршень не тефлоновый - работать тоже будет, но можно использовать просто стандартный фаст метод вместо вариабле.
Во всех промывочных виалах - этилацетат.
В виалке для сэндвича - этилацетат безводный.

Front Injector
Syringe Size 10 uL
Injection Volume 1 uL
Solvent A Washes (PreInj) 0
Solvent A Washes (PostInj) 5
Solvent A Volume 8 uL
Solvent B Washes (PreInj) 2
Solvent B Washes (PostInj) 2
Solvent B Volume 8 uL
Sample Washes 0
Sample Wash Volume 2 uL
Sample Pumps 0
Dwell Time (PreInj) 0 min
Dwell Time (PostInj) 0 min
Solvent Wash Draw Speed 300 uL/min
Solvent Wash Dispense Speed 1000 uL/min
Sample Wash Draw Speed 300 uL/min
Sample Wash Dispense Speed 1000 uL/min
Injection Dispense Speed 6000 uL/min
Viscosity Delay 3 sec
Sample Depth -2 mm
Injection Type 2-layer Sandwich
L1 Airgap 1 uL
L2 Volume 0.2 uL
L2 Airgap 0.4 uL



Front SS Inlet He
Mode Pulsed Splitless
Heater On 250 °C
Pressure On 13.317 psi
Total Flow On 54.456 mL/min
Septum Purge Flow On 3 mL/min
Septum Purge Flow Mode Switched
Gas Saver On 15 mL/min After 4 min
Injection Pulse Pressure 36.259 psi Until 0.5 min
Purge Flow to Split Vent 50 mL/min at 1 min

Вот хорошая шпаргалка http://www.chem.agilent.com/Library/poster...5988-6191RU.pdf

Сообщение отредактировал alexlp - 17.11.2013 - 12:33

[Гермиона]

Доброго времени суток, коллеги!
Искренне благодарю за дельные советы.
Сегодня дежурю допоздна, хочу попробовать настроить уже автосамплер "нормально", следуя Вашим рекомендациям. Что получится - отпишусь.
Кстати, способ ввода сэндвичем имеется, посмотрела.

Сообщение отредактировал Гермиона - 17.11.2013 - 12:48

[Гермиона]

Ох... не заметил... Но вопрос остаётся - перед ручным заколом "PrepRun" на панели прибора нажимаете?

Если честно, в последнее время и правда перестала PrepRun нажимать при ручном вводе. Это из-за вечной спешки... Растворяем сухой остаток в спирте, надо уже тоже привыкать к этилацетату, как в методиках написано. Вобщем, есть над чем поработать.

[alexlp]

Кстати, способ ввода сэндвичем имеется, посмотрела.

Обратите внимание, что для сэндвича нужна еще одна виалка с растворителем во второй позиции. Посмотрите мануал.

[Гермиона]

Обратите внимание, что для сэндвича нужна еще одна виалка с растворителем во второй позиции. Посмотрите мануал.

Спасибо, как раз хотела уже спрашивать, куда ставить виалку. То есть, задавать номер виалы с этилацетатом для сэндвича не надо?

[alexlp]

На турели самплера есть доп. маркировка: L1, L2, L3 это номера Layer для сэндвича. Сейчас поищу мануал и поправлюсь, если соврал.

[alexlp]

Если честно, в последнее время и правда перестала PrepRun нажимать при ручном вводе. Это из-за вечной спешки... Растворяем сухой остаток в спирте, надо уже тоже привыкать к этилацетату, как в методиках написано. Вобщем, есть над чем поработать.

Нельзя пренебрегать вводом. Как введете - то и получите. Ввод пробы в капиллярную колонку - отдельная наука. Мелочей-нет. И еще надо ясно представлять себе все процессы, происходящие в испарителе и в колонке на начальном этапе: холодное улавливание, эффект растворителя и пр. Читайте! http://www.anchem.ru/chromos/vegh.pdf

Сообщение отредактировал alexlp - 17.11.2013 - 13:33

[alexlp]

На турели самплера есть доп. маркировка: L1, L2, L3 это номера Layer для сэндвича. Сейчас поищу мануал и поправлюсь, если соврал.

На 16-гнездной турели есть гнезда L2,L3 - 15 и 16 место. Если используете сэндвич L2 - то в 15 гнездо ставите виалку с растворителем, если L3 - то в 15 и 16 гнезда ставите виалки с растворителем.