Здравствуйте, гость ( Вход | Регистрация )

Форум судебных медиков России
 
>

RT-PCR, неверные результаты,эффективность ПЦР, Slope

>
prostochock
сообщение 15.07.2014 - 17:37
Сообщение #1


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


здравствуйте! с момента внедрения в наш технологический процесс роботов автоматической дозировки и раскапывания миксов QIAgility появились проблемы с достоверностью данных полученных после RT-PCR. Полученные данные занижены. В некоторых случаях образцы с полученной концентрацией равной "0" дают при дальнейшем форезе читабельные фореграммы. Зачастую образцы со средней концентрацией, диапозоном от 0,5 до 5 нг/мкл после нормализации дают на фореграммах "зашкал". Решать этот вопрос мы приспособились, однако понять и устранить причину не получается. Кто может, отзовитесь, помогите, пожалуйста!!! rolleyes.gif
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
genosys
сообщение 15.07.2014 - 17:46
Сообщение #2


Опытный участник

Группа: Участники
Регистрация: 2.08.2011
Пользователь №: 28 146


Судя по описанию проблемы, у Вас просто съехала калибровка и прибор занижает концентрацию ДНК. Читайте мануал как это исправить или просто введите поправку и не заморачивайтесь smile.gif

ЗЫ: название темы все-таки лучше делать информативным...
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
prostochock
сообщение 15.07.2014 - 20:22
Сообщение #3


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


Цитата(genosys @ 15.07.2014 - 18:46)
Судя по описанию проблемы, у Вас просто съехала калибровка и прибор занижает концентрацию ДНК. Читайте мануал как это исправить или просто введите поправку и не заморачивайтесь smile.gif

ЗЫ: название темы все-таки лучше делать информативным...


спасибо за подсказку с названием темы. В следующий раз учту. unsure.gif
калибровал буквально месяц назад, т.к. подумал, что проблема именно в этом и просто пол года как не калибровался уже, но это не помогло. В мануале подобной информации нет. погрешность ввели (было мной указано что вопрос то технически решили). вопрос в причине этой проблемы остается открытым. rolleyes.gif
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
LiGr
сообщение 27.07.2014 - 19:45
Сообщение #4


Новичок

Группа: Участники
Регистрация: 27.07.2014
Пользователь №: 39 996


доброго вечера. вероятнее всего проблема в калибровке. попробуйте снова сами или пригласите специалиста.
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
prostochock
сообщение 30.07.2014 - 10:41
Сообщение #5


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


Цитата(LiGr @ 27.07.2014 - 20:45)
доброго вечера. вероятнее всего проблема в калибровке. попробуйте снова сами или пригласите специалиста.

Калибровался уже. И мылся.
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
LMP
сообщение 7.08.2014 - 11:05
Сообщение #6


Вновь прибывший

Группа: Участники
Регистрация: 18.10.2013
Пользователь №: 37 967


Цитата(prostochock @ 30.07.2014 - 11:41)
Калибровался уже. И мылся.


Концентрацию ДНК стандарта проверьте (например обычным спектрофотометром). Не исключено, что она заниженная.
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
prostochock
сообщение 18.08.2014 - 19:12
Сообщение #7


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


Цитата(LMP @ 7.08.2014 - 12:05)
Концентрацию ДНК стандарта проверьте (например обычным спектрофотометром). Не исключено, что она заниженная.

спасибо! помогли! Вы были правы!
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
genosys
сообщение 18.08.2014 - 22:56
Сообщение #8


Опытный участник

Группа: Участники
Регистрация: 2.08.2011
Пользователь №: 28 146


Цитата(prostochock @ 18.08.2014 - 18:12)
спасибо! помогли! Вы были правы!

... т.е. делая калибровку, Вы не проверили конц-ю стандартов?! Неужели это в инструкции не написано? deal1.gif
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
prostochock
сообщение 19.08.2014 - 20:10
Сообщение #9


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


Цитата(genosys @ 18.08.2014 - 23:56)
... т.е. делая калибровку, Вы не проверили конц-ю стандартов?! Неужели это в инструкции не написано? deal1.gif

при проведении калибровки стандарты в принципе не нужны. мануал почему то не грузится хотя я его сжал. могу на почту кинуть, если интересно

Сообщение отредактировал prostochock - 19.08.2014 - 20:13
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием




- Обратная связь Сейчас: 29.03.2024 - 04:23