Здравствуйте, гость ( Вход | Регистрация )

Форум судебных медиков России
 
>

"Концентрирование" амплификата, Возможная работа со всем объемом амплификата

>
prostochock
сообщение 28.10.2015 - 09:49
Сообщение #1


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


Здравствуйте!
Вопрос такой. Возможно ли использовать Amicon для "концентрирования" амплификата. Сейчас объясню что имею ввиду. Получили амплификат объемом 25мкл, который содержит кучу "мусора" (неотработанные праймеры, NTP и тд). К тому же на форез берем лишь 1 мкл от всех ампликонов. Таким образом, при работе с объектами трудными профиль либо не выходит, либо частичный.
Вопрос поры амикона не слишком ли велики для наших ампликонов? И как я понимаю есть Amicon с различным размером пор (или я заблуждаюсь?)

Заранее спасибо.
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
Razum72
сообщение 1.11.2015 - 09:29
Сообщение #2


Участник форума

Группа: СМЭ
Регистрация: 9.08.2009
Пользователь №: 16 133


Добрый день, уважаемые форумчане!
Рrostochock, амиконы существуют с различным размером пор. Размер пор определяется способностью пропускать вещества в зависимости от их молекулярной массы (Mr), последняя измеряется в килодальтонах, т.о. колонка Амикон 100кДа пропускает все, что по Mr меньше 100кДа. Вам необходимо рассчитать диапазон Mr ваших ампликонов (http://molbiol.edu.ru/appendix/02_02.html) и подобрать соответствующую колонку. Если Вы имеете ввиду "стандартный" идентификационный анализ ПДАФ-типа, то подойдет Амикон 0,5 100кДа, только, по моему мнению, это Вам никаким образом не поможет, избавление от "мусора" в амплификате не решит проблему "частичного" профиля. Всего доброго.
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием
prostochock
сообщение 2.11.2015 - 12:19
Сообщение #3


Претендент

Группа: Участники
Регистрация: 2.11.2012
Из: Саратов
Пользователь №: 34 543


Цитата(Razum72 @ 1.11.2015 - 10:29)
Добрый день, уважаемые форумчане!
Рrostochock, амиконы существуют с различным размером пор. Размер пор определяется способностью пропускать вещества в зависимости от их молекулярной массы (Mr), последняя измеряется в килодальтонах, т.о. колонка Амикон 100кДа пропускает все, что по Mr меньше 100кДа. Вам необходимо рассчитать диапазон Mr ваших ампликонов (http://molbiol.edu.ru/appendix/02_02.html) и подобрать соответствующую колонку. Если Вы имеете ввиду "стандартный" идентификационный анализ ПДАФ-типа, то подойдет Амикон 0,5 100кДа, только, по моему мнению, это Вам никаким образом не поможет, избавление от "мусора" в амплификате не решит проблему "частичного" профиля. Всего доброго.

Большое Вам спасибо. Вроде мои ампликоны не должны провалиться) о результах отпишусь, если интересно)
Пользователь offline
К началу страницы
+Ответить с цитированием




- Обратная связь Сейчас: 25.04.2024 - 21:06