Пробоподготовка в ХТ и СХ анализе



Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Аналитическая и судебная токсикология
KSS17
Здравствуйте!
Думаю, здесь будет самое место для статеек по пробоподготовке в ХТ и СХ анализе.

Обзор по твердофазой микроэкстракции (ТФМЭ)
Недавние события в разработках технологии твердофазой микроэкстракции и её применения в приложении к пищевой промышленности, окружающей среде и биоаналитической химии.
Кратко представлена историческая перспектива от самых ранних работ, связанных с развитием теоретических принципов ТФМЭ. Особое внимание сделано на самые последние разработки в области автоматизации, высокой пропускной способности анализа, методы оптимизации ТФМЭ, подходы и строительство новых устройств ТФМЭ и их применения.
Язык, как понимаем, английский…


Гермиона
Здравствуйте, коллеги!
Имеет смысл продолжить тему пробоподготовки.
Вариантов извлечения искомых соединений из биологического материала немало, но многие из нас, мягко говоря, "не все знают".
Например, слышала о применении в ходе пробоподготовки замораживания образцов вместе с органической фазой, но нигде не встречала в литературе. Или не там искала.
Помогите, пожалуйста, если кто применяет этот метод.


chemist-sib
Доброго времени суток, коллега Гермиона. Вроде бы, была в СМЭ статья (и, вроде бы, сочинских химиков) про экстракцию производных 1,4-бензодиазепина из мочи вымораживанием. Пытаюсь сейчас ее найти; может, кто из коллег быстрее это сможет сделать?
ЗЫ: вот, наконец-то (конкретно там про оксазепам и феназепам):
Бехтерев В.Н., Гаврилова С.Н., Маслаков И.В. Использование экстракционного вымораживания для анализа 1,4-бензодиазепинов в моче. – Суд.-мед. эксперт.-2007.-№ 2.-С.32-35. Список лит.: С.35 (6 названий).
ЗЫЗЫ: но сам, своими руками, не повторял.


sch1sm
Цитата(Гермиона @ 14.12.2013 - 13:26)
Здравствуйте, коллеги!
Имеет смысл продолжить тему пробоподготовки.
Вариантов извлечения искомых соединений из биологического материала немало, но многие из нас, мягко говоря, "не все знают".
Например, слышала о применении в ходе пробоподготовки замораживания образцов вместе с органической фазой, но нигде не встречала в литературе. Или не там искала.
Помогите, пожалуйста, если кто применяет этот метод.

вот тут статья небольшая, Пермская государственная фармацевтическая академия написала.
кое что пытаюсь сейчас повторить из статей, но хвалиться пока особо не чем(мало наработал материала)


Deminolog
Есть такой подход, называется "экстракционное вымораживание". Несколько лет назад на эту тему (ну, не только на эту, но и она затрагивалась) была защита докторской диссертации в МГУ, защищался Бехтерев Виктор Николаевич, г. Сочи, специальность 02.00.02 - аналитическая химия... Если загуглить - сразу попадаете на ссылку на патент об экстракционном вымораживании карбоновых кислот (по-моему).
Данный подход очень хорош и удобен тем, что, фактически, повышает эффективность ЖЖЭ. Это, можно сказать, модификация. При понижении температуры растворимость в воде у некоторых соединений падает и они сначала переход на границу раздела фаз, а при замерзании воды - переход в органический слой, хотя в н.у. этого бы не произошло.
При анализе НС и ПВ, в частности, удобно применять следующий способ: провести гидролиз (например, ферментативный), после чего добавить буру для того, чтобы довести рН до 9-10 (или же просто добавить аммиак), безводный сульфат натрия (или любой другой высаливатель), перемешать тщательно, добавить органический растворитель (например, диэтиловый эфир, который легко будет потом отогнать или упарить). Поставить на встряхиватель, чтобы добиться хорошего перемешивания. Спустя какое-то время пробы центрифугируются и ставятся либо в морозилку, либо в криотермостат. После того, как водный слой замерзнет, аккуратно перенести органический слой в отдельную посуду (пробирку). Эфирный слой легко улетит при температуре 45-50 градусов, при этом практически не будет потери аналита. После упаривания можно реконструировать экстракт в любом удобном растворителе, провести дериватизацию... В общем, все зависит от того, какой метод для анализа Вы планируете использовать дальше.
Относительно ТФЭ и микроТФЭ.
Существуют разные системы для проведения подобных экспериментов: манифолды положительного давления и вакуумные манифолды. Автоматизированные системы ТФЭ, на сегодняшний день, не получили (да и не получат) массового распространения в виду своей громоздкости и стоимости, хотя они иногда бывают очень удобны.
Существуют также системы on-line SPE, когда патрон подключается в систему ВЭЖХ. Есть headspace, когда сорбируют на волокно в шприце, а потом десорбируют в инжектор ГХ. Эти системы активно развиваются и, думаю, будущее за ними.
Но вернемся к более простым, понятным и, я бы сказал, удобным системам. Это системы с вакуумным манифолдом и манифолдом положительного давления. Вакуумный манифолд удобен тем, что он универсален. В идеале, вакуумный манифолд должен быть укомплектован еще кранами для регуляции скорости потока, проходящего через патрон. Тогда эта система становится незаменимым помощником для Вас. Без этих кранов Вы увидите, что скорость каплепадения слишком велика (если только насос не позволит регулировать разряжение), а значит легко может произойти проскок аналита. Более того, каплепадение возле крана, подключаемого к насосу, будет сильнее. Отсюда вытекает главный недостаток вакуумных систем - неравномерность.
Манифолд положительного давления питается либо воздухом, либо азотом, подаваемым либо компрессором, либо генератором. Удобная штука. Давит равномерно, если уплотнение наклеено верно. Удобно сушить патроны для элюирования органикой и последующей дериватизации. Недостатки - для работы с микроТФЭ придется покупать отдельный манифолд на 96 позиций (маленькие патрончики не встанут), а для всех остальных - манифолд на 48 позиций с разными держателями под разные формы патронов. Кроме того, манифолды положительного давления стоят намного дороже.
Сейчас стали очень популярны так называемые well-plate. Плашки для микроТФЭ на 96 образцов.
Сорбентов для ТФЭ - великое множество. Также набирают популярность ионно-обменные сорбенты, работающие по смешанному механизму удерживания, сорбенты на основе дивинилбензола, который, кстати, широко используется при получении монолитных колонок для ВЭЖХ...
Вот как-то так... Простите за лекцию, просто недавно небольшой обзорчик писал, тоже этот вопрос поднимал :-) Если что - готов обсудить какие-то моменты подробнее...


Гермиона
Здравствуйте, коллеги!
Благодарю за подробные ответы. Честно говоря, думала вначале, что вымораживание применяют в каких-то частных методиках. Обязательно буду пробовать в рутине, если выход НС окажется ощутимо выше, введу в пробоподготовку дополнительный пункт, тем более что совсем нетрудно на какое-то время поместить образцы в морозильную камеру.
ТФЭ с обычным манифолдом мы применяем значительно реже, чем ЖЖЭ - всё-таки времени на неё уходит больше, больше манипуляций. А когда образцов много - важно ещё, чтобы они не скапливались.
Системы он-лайн подготовки для ВЭЖХ имела удовольствие видеть на одной из выставок. То, что я видела - достаточно большого размера прибор, и стоимость не низкая. Конечно, стремиться к совершенству надо, и рано или поздно мы придем к применению ТАКИХ технологий, тем более, что они более безвредные для специалиста, выполняющего пробоподготовку (в смысле - меньше дышать органикой). Но пока приходится работать тем, что есть...


Deminolog
Да ну не так уж и страшен черт, как его малюют smile.gif Работая на ВЭЖХ люди просто чуть ли не по уши в растворителях, главное - не пить их smile.gif
ТФЭ и микроТФЭ, правильно поставленные, становятся куда более экспрессным методом, нежели ЖЖЭ. Пропустить 5 мл пробы через патрон, смыть 500 мкл ацетонитрила (например), упарить, продериватизировать, разбавить и колоть - на манифолдах это очень быстро. Да даже и в ручную хорошо можно сократить время smile.gif Но привыкать - да, надо. И методики ставить надо.


Гермиона
В статье, которой любезно поделился с нами уважаемый sch1sm нашла такой этап перед ТФЭ:

"Перед проведением ТФЭ образец мочи разбавляли 1 % раствором муравьиной
кислоты (1:1) для разрушения связей аналитов с белками."

Как вы думаете, это заменяет гидролиз (который мы обычно проводим - с концентрированной кислотой или ферментативный), или дополняет?


Deminolog
Не заменяет, ни в коем случае smile.gif
Кислота нужна только для того, чтобы высадить белок. Вы можете взять для этого также и ТХУ или ТФУ. Но вот разрушить конъюгаты эффективно и достаточно быстро может только солянка концентрированная или фермент.


KSS17
Здравствуйте!

Осаждение белков 1% муркой? Разрушение связи с белками в моче? blink.gif
Или бред, или в мире что-то не так... smile.gif

Вымораживание может и хороший метод для выделения, но без апробации я бы им не рекомендовал развлекаться. Не исключено, что балластных веществ навымораживает столько, что эффективность данной процедуры оправдана не будет.

На опыте работы с ТФЭ могу заверить, что это лучший метод для пробоподготовки крови. Варьируя условия под аналит можно добиться очень хороших результатов, которые ни в какое сравнение с ЖЖЭ и и вымораживанием не пойдут.
Практически все количественные методики анализа наркотических и лекарственных веществ в крови мы поставили под ТФЭ, чего и остальным желаю... wink.gif


Гермиона
Благодарю, коллеги!
Конечно, всё будем сначала пробовать, прежде чем "ставить на поток".


Deminolog
Осадить можно ;-) Если бы этот способ не работал - колонки не жили бы больше 100-200 вколов, думаю smile.gif Хотя много лучше будет работать с ТФУ или ТХУ для этих целей smile.gif Практика довольно распространенная, особенно когда речь идет о практически прямом анализе мочи, где имеет место быть только разбавление пробы, после чего центрифугирование и анализ ВЭЖХ-МС/МС.


alexlp
Цитата(KSS17 @ 16.12.2013 - 14:51)
Здравствуйте!

Осаждение белков 1% муркой? Разрушение связи с белками в моче? blink.gif
Или бред, или в мире что-то не так... smile.gif

Вымораживание может и хороший метод для выделения, но без апробации я бы им не рекомендовал развлекаться. Не исключено, что балластных веществ навымораживает столько, что эффективность данной процедуры оправдана не будет.

На опыте работы с ТФЭ могу заверить, что это лучший метод для пробоподготовки крови. Варьируя условия под аналит можно добиться очень хороших результатов, которые ни в какое сравнение с ЖЖЭ и и вымораживанием не пойдут.
Практически все количественные методики анализа наркотических и лекарственных веществ в крови мы поставили под ТФЭ, чего и остальным желаю... wink.gif


Поддерживаю 200%


Deminolog
Ну, значит завтра надо будет сделать подборку статей, где как раз муравьинку и используют... smile.gif И не только для того, чтобы состав экстракта был максимально близок к составу подвижной фазы, а точнее, к градиенту первой ступени smile.gif
Хотя еще раз повторюсь, ТФУ или ТХУ для осаждения белка подойдет лучше smile.gif И, конечно, центрифугирование при 7-10 тыс об тоже необходимо smile.gif
Хотя я с муравьинкой делаю пробы и уже больше 800 вколов было - полет нормальный smile.gif Единственное, что могу отметить - кроме муравьинки для этой цели я добавляю ацетонитрил... smile.gif Причем процентов эдак 50-60. Но это может сыграть против Вас, если будете делать потом ТФЭ (смываться будет сразу). Так что в зависимости от процедуры меняется пробоподготовка.


D'ng
Цитата(KSS17 @ 16.12.2013 - 10:51)

Вымораживание может и хороший метод для выделения, но без апробации я бы им не рекомендовал развлекаться. Не исключено, что балластных веществ навымораживает столько, что эффективность данной процедуры оправдана не будет.

В начале 70-тых метод вымораживания пользовался популярностью у некоторых аналитиков , но постепенно к нему потеряли интерес. Попытки совместить вымораживание и высаливание тоже не приводили к воспроизводимым результатам.
Лично я этот метод в всерьез не рассматриваю , хотя для частных случаем он может и сгодится , но играться с концентрацией аналита в трехфазной системе (жидкость/жидкость/кристаллы) лично я не стану...


Deminolog
Насчет балластных, соэкстрактивных веществ - да, безусловно. там компот получается. Все же способ не отличается селективностью. Тут единственный способ как-то повысить избирательность - выбор органического растворителя. Но Вы же понимаете, что там особо не разгуляешься и сомнительно, поможет ли это.
А вот чтобы он стал более-менее воспроизводим (во многих лабораториях, занимающихся допинг-контролем подобные методики валидированы), необходимо очень хорошо выморозить пробы, причем достаточно быстро. Для этого берут криотермостаты.
P.S. Статьи еще не смотрел (сегодня денек дикий какой-то), но постараюсь сдержать обещание и именно сегодня выложить :-) Не вредности ради (всех участников дискуссии глубоко уважаю), а просто для конструктивного обсуждения smile.gif


Deminolog
Пересмотрел, перечитал, готов извиниться: чистая муравьинка действительно фиговый агент. ТХУ 10-12%, муравьиная кислота с ацетонитрилом, ледяная кислота ну и, конечно же, солянка - все это в приоритете. Естественно, еще лучше, когда есть нагрев. Сам для работы беру муравьинку с ацетонитрилом (у меня не для всех задач нужно рушить конъюгаты), когда надо разрушать коньюгированные формы - инкубирую с солянкой при 80 градусах где-то час-полтора, потом нейтрализую аммиаком.
P.S. Статьи и т.д. заливаются в архиве на google-диск, как только - так сразу выложу ссыль на них в соседней теме.


alexlp
Уважаемые Коллеги!

Предлагаю вам вариант вариант изолирования синтетических каннабимиметиков и их метаболитов с применением гидролитического деконьюгирования, сочетающий преимущества основного и кислотного гидролиза, твердофазной экстракции и получения метильных и триметилсилиьных дериватов для экстрактов из кислой и щелочной среды соответственно.
Совместим с библиотекой SUDMED.
На наш взгляд этот вариант может существенно сэкономить время и реактивы при серийных исследованиях.
Этот вариант изолирования основан на ранее опубликованных работах известных авторов.
(Хроматограммы, полученные этим методом, выкладывались мною ранее.)
Буду крайне признателен Коллегам за указания на ошибки и неточности.


alexlp
Существенный нюанс: рН "посадки" на сорбент ОЧЕНЬ КРИТИЧНО, поэтому используем такую процедуру: бумажку типа РИФАН (или аналог, позволяющий измерять рН до десятых) с одного конца смачиваем буфером, выверенном инструментально, а с другого конца наносим гидролизат. Цветной шкалой предпочитаем не пользоваться.


Sergei4
Здравствуйте, а для Strata C18E этот протокол пойдет?


alexlp
Цитата(Sergei4 @ 16.01.2014 - 22:15)
Здравствуйте, а для Strata C18E этот протокол пойдет?

Это для смешанных сорбентов онли.


KSS17
Здравствуйте!
Цитата(Sergei4 @ 16.01.2014 - 21:15)
Здравствуйте, а для Strata C18E этот протокол пойдет?


Да, если интересуют только каннабимиметики, т.е. до первого элюата...
В таком случае (с С18) вместо буфера можно использовать уксусную кислоту.


Deminolog
Добрый день!
Простите пожалуйста, а не подскажите как насчет стимуляторов? Понимаю, на смешанном сорбенте они лучше должны будут сидеть (или хотя бы не эндкеппированном С16-С18, например), особенно их метаболиты, но на С18 если без органики прогнать пробу, а потом попробовать элюировать ацетонитрилом? Или проскакивает много?


alexlp
Цитата(Deminolog @ 17.01.2014 - 12:12)
Добрый день!
Простите пожалуйста, а не подскажите как насчет стимуляторов? Понимаю, на смешанном сорбенте они лучше должны будут сидеть (или хотя бы не эндкеппированном С16-С18, например), особенно их метаболиты, но на С18 если без органики прогнать пробу, а потом попробовать элюировать ацетонитрилом? Или проскакивает много?

Полагаю, что все будет зависеть от рН посадки на сорбент... А Вы принципиальный противник смешанных сорбентов?


Deminolog
Помилуйте, какой же я противник? smile.gif Напротив, я сторонник ТФЭ во всех проявлениях. Начиная от банальной очистки образцов и заканчивая on-line ТФЭ smile.gif Просто всегда интересен опыт коллег. Может уже пробовали, поэтому и решил спросить... Обычное любопытство smile.gif
За ссылки огромное спасибо, этих у меня не было. Поделюсь также одной статьей обзорной из JoC A, она хоть и 99 г, но вроде неплохая, может пригодится кому-нибудь smile.gif
По поводу рН - согласен, будет влиять, равно как и состав той пробы, которая будет сажаться на сорбент... Ибо если будет что-то типа ацетонитрила, этанола, метанола в пробе - есть вероятность, что просто проскочит...


Sergei4
Здравствуйте,
Цитата
Да, если интересуют только каннабимиметики, т.е. до первого элюата...
В таком случае (с С18) вместо буфера можно использовать уксусную кислоту.

а если интересует второй элюат тоже?


KSS17
Здравствуйте!
Цитата(Sergei4 @ 17.01.2014 - 14:13)
Здравствуйте,

а если интересует второй элюат тоже?


Для С18 свои режимы работы для основных веществ и веществ кислотного характера. Придется использовать два патрона и делать две пробы для одного образца, каждую в своем режиме.


alexlp
Последний доступный Applications Manual от UCT по ТФЭ


Korvet
Ранее в теме про семинары, кажется, выкладывалось сообщение челябинского СМЭ о пробоподготовке методом QUECHERS, имею два вопроса:
1 опробовал ли кто-то еще что-то подобное.
2. а что если перенести данную методу с печени на например мочу. много ли не нужного балласта можно наблюдать в ацетонитрильном экстракте. я сегодня сделал эксперимент на воде правда. в качестве подопытных морфин, АМ-2201, индометацин (по 1 мкг\мл воды). к сожалению забыл внести стандарт, поэтому степень экстракции оценить не могу, но видно прекрасно все компонентны. экстрагировал вообще из нейтральной среды...





Korvet
еще в догоночку. хочется услышать мнения


alexlp
Цитата(Korvet @ 23.01.2014 - 20:45)

2. а что если перенести данную методу с печени на например мочу.

Полагаю, что в первую очередь напрашивается перевод и адаптация метода для слюны и различных смывов с поверхности тела. Для этих объектов , пожалуй, может быть достаточно лишь очистки ацетонитрильного экстракта на обращеннофазном сорбенте с последующей заменой растворителя... ИМХО


Korvet
я практиковал вот что:
при исследовании смывов с рук (очень жирные как правило объекты):
делал спиртовой смыв, упаривал его до минимального объема, разбавлял водой примерно 1\10, затем прибавлял немного ацетонитрила (1-2мл) и столько же гексана, высаливал хлоридом кальция. (потом мне сказали что брать сульфат магния). В результате после взбалтывания и отстаивания получалось три слоя (снизу вверх) вода-ацетонитрил-гексан. отбирал конечно средний. довольно чистенько получалось....


то есть штука в том что гексан не смешивается с ацетонитрилом (хотя какое-то взаимное растворение у них конечно есть), и вместо очистки ацетонитрила твердофазным сорбентом наверное можно использовать экстракцию из него гексаном липидов.


KSS17
Здравствуйте!
Ну это новое, как говориться, хорошо забытое старое...
Остаток растворяют в метаноле или ацетонитриле (лучше 80%. 0,4-0,5 мл), затем экстрагируют гексаном (4-5 мл) в соотношении 1:10, нижний слой отбирают и исследуют.
Тут могут быть некоторые потери нативных каннабиноидов.
При исследовании смывов мы избегаем каких либо дополнительных процедур (очистка, дериватизация), дабы не исказить результатов.


A58
Цитата(Korvet @ 23.01.2014 - 17:45)
Ранее в теме про семинары, кажется, выкладывалось сообщение челябинского СМЭ о пробоподготовке методом QUECHERS, имею два вопроса:
1 опробовал ли кто-то еще что-то подобное.
2. а что если перенести данную методу с печени на например мочу. много ли не нужного балласта можно наблюдать в ацетонитрильном экстракте. я сегодня сделал эксперимент на воде правда. в качестве подопытных морфин, АМ-2201, индометацин (по 1 мкг\мл воды). к сожалению забыл внести стандарт, поэтому степень экстракции оценить не могу, но видно прекрасно все компонентны. экстрагировал вообще из нейтральной среды...


Здравствуйте коллеги! Методика Челябинского бюро СМЭ разрабатывалась исключительно для "потрохов". Чтобы применять QUECHERS для других объектов (с иным содержанием воды) необходимо менять состав смесей для экстракции и очистки. А после подбора состава снова тестировать. Готовые наборы TOX неплохо работают для большинства наркотиков, хуже извлекаются сильно гидрофильные основания (типа изониазида) и гидрофобные кислоты (типа вальпроевой), так как смесь для очистки предназначена, в основном, для очистки от жирные кислот и липидов. Мне кажется для синтетики типа PB (имеющей в основном кислые метаболиты) готовый состав не подойдет, так как степени извлечения метаболитов будут низкими, а вот для JWH, вполне пригодны.


Korvet
просто ради уточнения. А "готовые наборы ТОХ" это так называемые TOXITUBE А и Б? или это подготовленные QUECHERS для этих целей? или имеется в виду что-то иное?
если это то что описано у челябинских коллег. то наверное и выход многих жвх будет невысокий, ибо болольно уж гидрофобны (судя по времени выхода на вэжх)...


A58
Цитата(Korvet @ 24.01.2014 - 18:38)
просто ради уточнения. А "готовые наборы ТОХ" это так называемые TOXITUBE А и Б? или это подготовленные QUECHERS для этих целей? или имеется в виду что-то иное?
если это то что описано у челябинских коллег. то наверное и выход многих жвх будет невысокий, ибо болольно уж гидрофобны (судя по времени выхода на вэжх)...

Наборы называются VetexQ Tox
http://quechers.ru/library/vetex-tox_v2.pdf
Выход высоколипофильных веществ (клозапин, верапамил, нативного JWH-018) более 60%. Однако кислые метаболиты будут извлекаться хуже. Наборы разработаны только для тканей, для биожидкостей не испытывались, так как для мочи есть более простые и испытанные методики, включающие Enz HY & SPE.


Korvet
большое спасибо, много полезной информации


Korvet
я что-то как-то сообразить не могу какая же рН экстракции все таки в предлагаемом методе VetexQ Tox.

то есть там смесь Na3Cit и Na2HCit, по идее как раз где-то около 8 наверное, тогда зачем предлагается добавлять соляную кислоту? Но Вы пишите что кислые метаболиты извлекаются хуже, значит рН водной среды все равно. где-то больше 7...или по какой причине проблема с кислыми метаболитами?


alexlp
Наводит на мысль, что замыкание кольца происходит в сильнокислой среде (см. амфетаминовую методу в архиве)


A58
Цитата(Korvet @ 24.01.2014 - 21:52)
я что-то как-то сообразить не могу какая же рН экстракции все таки в предлагаемом методе VetexQ Tox.

то есть там смесь Na3Cit и Na2HCit, по идее как раз где-то около 8 наверное, тогда зачем предлагается добавлять соляную кислоту? Но Вы пишите что кислые метаболиты извлекаются хуже, значит рН водной среды все равно. где-то больше 7...или по какой причине проблема с кислыми метаболитами?


Коррекция рН при экстракции идет только добавкой солянки. Начинали оптимизацию действительно с цитратного буфера, но очистка экстрактов с солянкой идет гораздо лучше. Метаболиты и др. аналиты с карбокси- группой извлекаются хуже, так как составы экстракции и очистки подобраны для максимального удаления из экстрактов жирных кислот. Последние извлекаются из органов (особенно загнивших) в огромном количестве и сильно мешают анализу.
Для анализа биожидкостей по Quechers нужен совсем другой состав наборов и условия подготовки. Методик, использующих этот метод для анализа продуктов питания очень много, так что простор для творчества есть.
Вот сама методика: Нажмите для просмотра прикрепленного файла


Korvet
A58, но в "набор солей для экстракции" , то есть то что Вы первое добавляете входит цитратный буфер, хлористый натрий и сульфат магния. поскольку потом еще добавляется солянка, то я и спрашиваю какая же рН в оконцовке. То есть мне просто хочется понять принцип эктракции.
То есть например если экстрагент хлороформ, то мы делаем среду щелочную, в хлороформ идут основания. Если вещества кислые надо добавить кислоты, в хлороформ (например) пойдут кислые вещества.
Здесь как-то наоборот получается, подкисляем (хотя какая рН за счет цитратов все же вопрос), и получается что с кислотными метаболитами проблема. Очистка от ЖК и прочих липидов в методике идет за счет того что они остаются на С18, а к ацетонитрилу у них низкое сродство. рН тут особой роли не играет, разве только для ЖК.

методик тьма, Вы правы, вот как раз вчера читал для соков, но там тоже самое все. Количество воды примерно одинаковое везде, как известно органы человека на 80% из нее состоят, так что печень, что моча, я не думаю что разница будет большая, разе только С18 можно не добавлять...

вот общий подход изложен на постере
http://www.chem.agilent.com/Library/poster..._concept1_1.pdf

alexlp, я не вижу на Вашей TMS хроматограмме то что я вижу на своих где есть метаболиты этого вещества. Но в своих я уверен, я проверял фрагментацию ионов на мс-мс. Но возможно здесь просто другая стадия метаболизма...хотя у меня было 2 образца - 20часов после приема и 6 часов...


A58
Цитата(Korvet @ 25.01.2014 - 09:31)
A58, но в "набор солей для экстракции" , то есть то что Вы первое добавляете входит цитратный буфер, хлористый натрий и сульфат магния. поскольку потом еще добавляется солянка, то я и спрашиваю какая же рН в оконцовке. То есть мне просто хочется понять принцип эктракции.
То есть например если экстрагент хлороформ, то мы делаем среду щелочную, в хлороформ идут основания. Если вещества кислые надо добавить кислоты, в хлороформ (например) пойдут кислые вещества.
Здесь как-то наоборот получается, подкисляем (хотя какая рН за счет цитратов все же вопрос), и получается что с кислотными метаболитами проблема. Очистка от ЖК и прочих липидов в методике идет за счет того что они остаются на С18, а к ацетонитрилу у них низкое сродство. рН тут особой роли не играет, разве только для ЖК.

методик тьма, Вы правы, вот как раз вчера читал для соков, но там тоже самое все. Количество воды примерно одинаковое везде, как известно органы человека на 80% из нее состоят, так что печень, что моча, я не думаю что разница будет большая, разе только С18 можно не добавлять...

вот общий подход изложен на постере
http://www.chem.agilent.com/Library/poster..._concept1_1.pdf


В набор солей для экстракции VetexQ Tox цитраты не входят, только NaCl и сульфат магния. А в набор для очистки входит еще один компонент, который совместно с солянкой из экстракта способствует осаждению ЖК. Их совместное присутсвие значительно (статистически значимо) повышает соотношение сигнал-шум практически для всех аналитов.


Korvet
это странно, у наших в судебке такой же наборчик как на рисунке из Вашей ссылке, там на пакетике написано что цитраты входят в состав. вероятно есть разные версии этого набора?

"еще один компонент из набора для очистки" вероятно так называемый "PSA" именно его для удаления кислот в этих методах используют, тогда понятно почему кислотные метаболиты дискриминируются...


Korvet
ацетонитрил для мочей не подходит, он всю мочевину забирает, и вообще много полярщины. хроматограммы более шумные получаются...


Elena_Kr
Добрый день!

Не хочется ошибиться при выборе SPE картриджей! Подскажите, пожалуйста, картриджи со смешанной фазой маркируются HLB у любого производителя, или у каждой фирмы свои обозначения?


alexlp
Цитата(Elena_Kr @ 29.01.2014 - 19:22)
Добрый день!

Не хочется ошибиться при выборе SPE картриджей! Подскажите, пожалуйста, картриджи со смешанной фазой маркируются HLB у любого производителя, или у каждой фирмы свои обозначения?


Если мне память не изменяет, то HLB - это гидрофильно-липофильно сбалансированный полимерный сорбент OASIS от Waters. Он не относится к смешанным сорбентам, хотя смешанные полимерные сорбенты и существуют.
Лично у меня положительного опыта работы с полимерными сорбентами к сожалению нет. Они, несомненно, обладают определенными преимуществами, и прежде всего - стойкость к высушиванию,
но они и существенно дороже и не поддаются регенерации (из моего опыта). Возможно, я не достаточно настойчиво занимался этими сорбентами.
Мне известно два производителя таких сорбентов: Waters( OASIS ™ ) Нажмите для просмотра прикрепленного файла и Phenomenex (Strata ™ ). Нажмите для просмотра прикрепленного файла

Из классических (C18+ионообменник) смешанных сорбентов в нашей стране доступны продукты от
1. Agilent -AccuBOND EVIDEX II - 3 мл/200 mg, они несколько дороже, но и по качеству они получше. Можно купить через ИНТЕРЛАБ.

2. Phenomenex - Strata Screen-C - 3 мл/200 mg это хороший бюджетный вариант, можно купить через Аквилон.

К сожалению, ни один реселлер не имеет запасов в РФ, поэтому сроки поставки - от 90 суток...


Elena_Kr
Спасибо! т.е. определенной маркировки для смешанных сорбентов нет!
В описании картриджей "Оасис" значится сбалансированный обращеннофазный сорбент гидрофильно-липофильный....

Еще вопрос: Как вы регенерируете использованные картриджи!? :-))))


alexlp
Цитата(Elena_Kr @ 29.01.2014 - 21:22)

Еще вопрос: Как вы регенерируете использованные картриджи!? :-))))


Сперва надо отмыть внутреннюю полость и верхушку картриджа, соприкосавшуюся с пробой! Затем - сорбент органическими растворителями, водно спиртовым раствором HCl, водой и затем высушиваем.


Цитата
т.е. определенной маркировки для смешанных сорбентов нет

У катионообменников часто присутствует букавка C, у анионообменников - букавка А


макsим
Добрый день. Уважаемые коллеги кто-нибудь использует в своей практики патроны для твердофазной экстракции компании Biotage ISOLUTE SLE+ 1ml. Как вы к ним относитесь в плане извлечения наркоты из мочи? http://www.biotage.com/product-page/isolute-sle


alexlp
Цитата(макsим @ 1.02.2014 - 13:46)
Добрый день. Уважаемые коллеги кто-нибудь использует в своей практики патроны для твердофазной экстракции компании Biotage ISOLUTE® SLE+ 1ml. Как вы к ним относитесь в плане извлечения наркоты из мочи? http://www.biotage.com/product-page/isolute-sle


К сожалению не приходилось встречаться с этим производителем.
Из линейки ISOLUTE для изолирования наркотических средств могут быть использованы патроны ISOLUTE® HCX3 и ISOLUTE® HCX, но обычные процедуры потребуется адаптировать к этим патронам.
Дело в том, что ISOLUTE® HCX3 по описанию является аналогом смешанного сорбента типа BondElute Sertify, но в их линейке нет подходящего типоразмера патронов, т.е содержащих 200 мг сорбента в патроне емкостью 3 мл.
Патроны ISOLUTE® HCX не являются полными аналогами сорбента типа BondElute Sertify, т.к. содержат группы С8 вместо С18 и это может существенно сказаться на удерживании аналитов.
Я полагаю, следует обратиться к их представителям, чтобы они разъяснили, какой продукт они позиционируют как замену патронов типа BondElute Sertify и аналогичных, и какие процедуры изолирования НС они предлагают для своих продуктов.

В каталоге этого производителя есть несомненно очень интересный и полезный прибор - станция автоматизированной ТФЭ RapidTrace, которую очень бы хотелось иметь в каждой лаборатории!


Korvet
Господа, хочется узнать кто что думает по поводу использования пластиковых центрифужных пробирок. с крышечками на 15мл. очень удобно... но ведь наверняка перенос вещества идет (при многоразовыом использовании). пользуется ли кто, или категорически противопоказано в ХТ анализе?


chemist-sib
Именно такие штуки ( а также - побольше, на 50 мл) только планирую начать использовать. Уже лежат в уголочке, подаренные smile.gif А вот наконечники к дозаторам, воронки из полиэтилена, пробки, стаканчики на 100 мл - используем уже очень давно и повсеместно, в контакте и с водными растворами, и с органикой, конечно же, не однократно, а пока полностью не сотрутся wink.gif . Мытье - самое обычное, даже без УЗ-ванн; серьезных пакостей до сих пор не замечали.


Ultor
Цитата(Korvet @ 18.02.2014 - 20:00)
Господа, хочется узнать кто что думает по поводу использования пластиковых центрифужных пробирок. с крышечками на 15мл. очень удобно... но ведь наверняка перенос вещества идет (при многоразовыом использовании). пользуется ли кто, или категорически противопоказано в ХТ анализе?


Пользуемся для экстракции полимерными пробирками Sarstedt и др. на 15 и 10мл лет 10 , моем в УЗ-бане, варим в них гидролизы. Переносов не замечено. Из минусов - лишние пики (компоненты полипропилена). По данным авторитетных коллег при хранении проб в пробирках происходит уменьшение концентрации канннабиноидов (вплоть до исчезновения )за счет сорбции на стенках. Также хотим попробовать пробирки на 50мл для экстракции из в/о .



Korvet
вот то-то и смущает что сорбция гидрофобных веществ на них будет, а ведь где сорбция там и десорбция...


D'ng
Кхм...
Посуда эта по идеи одноразовая. Как то не задумывался повторно использовать , но если есть сомнения то лучше внутрь вставить подходящую по диаметру стеклянную пробирку и по использованию мыть...


Kasandra16
Здравствуйте уважаемые коллеги. Нашла методику на азалептин. У меня есть начало, но отсутствует окончание. Подскажите.
К образцу крови (плазмы) добавить аскорбиновую к-ту, добавить метанол+1% муравьиная к-та, встряхнуть, отцентрифугировать, в пробирку для экстракции добавить щелочного буфера рН=8 (карбонат бикарбонат)......


hot_assay
Цитата(Kasandra16 @ 19.02.2014 - 10:27)
Здравствуйте уважаемые коллеги. Нашла методику на азалептин. У меня есть начало, но отсутствует окончание. Подскажите.
К образцу крови (плазмы) добавить аскорбиновую к-ту, добавить метанол+1% муравьиная к-та, встряхнуть, отцентрифугировать, в пробирку для экстракции добавить щелочного буфера рН=8 (карбонат бикарбонат)......

вопрос, касающийся клозапина, когда-то обсуждался: http://www.sudmed.ru/index.php?showtopic=18242
возможно, это не совсем корректно, но мы (в числе прочих вариантов) использовали прямую ЖЖЭ без каких-либо дополнительных процедур. Для токсического диапазона концентраций результаты вполне приемлемые. Другой дискуссионный вопрос - конвертация N-оксида (метаболита) в нативную молекулу при ГХ-исследовании. См. статью А.Б. Мелентьева.


Русская версия Invision Power Board © 2001-2019 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!