Определения карбоксигемоглобина в крови и мышечной ткани

А вообще кто каким методом-(ми) пользуется для определения карбоксигемоглобина в крови и карбоксимиоглобина в мышечной ткани?

Добрый день коллега! Тема, которую Вы затронули очень интересна!

Для определения MtHb в мышечной ткани, вот уже 35 лет я пользуюсь "Методическими указаниями о количественном определении карбоксигемоглобина и карбоксимиоглобина Москва, 1974 г.". На мой взгляд, даже на сегодняшний день эта методика остается актуальной.

Почему многие судебные эксперты- химики отрицательно относятся к этой методике? Дело в том, что г-жа Т.Н. Гладышевская при разработке методики не доосадила из раствора остатки ацетата свинца, смесью фосфатов (это приводит к тому, что при добавлении к раствору дитионита, раствор мутнеет-спектр снимать нет возможности). (стр.9, методички - .....прибавляют смесь фосфатов (на 10 мл жидкости прибавляют 0,1 г смеси), а следует прибавлять избыток смеси - около 0,18 - 0,2 г.

А для определения в крови HbCO я пользуюсь методикой см. ниже: java script:emoticon(':deal1:', 'smid_10') T.J. Siek and F. Rieders, Determination of carboxyhemoglobin in the presence of other blood hemoglobin pigments by visible spectrophotometry. J. Foren. Sci. 29:39-54,1984.

Добрый вечер коллега!
Очень интересны Ваши замечания, особенно по поводу мышечной ткани. Надо будет попробовать, т.к. действительно получались мутные растворы и как следствие не характерный спектр.
По поводу определения HbCO в крови, то пользуюсь одновременно двумя методами: Букина-Ушакова и Фрейтвурста-Майнеке, + ГХ + пробы с таннином и щелочью.
Про методику T.J. Siek and F. Rieders уже не раз слышал, но никак не могу найти в свободном распространении. В чем принцип данной методики? И если это конечно возможно, если не нарушаются какие-либо права, то просьба: можете выслать эту методику или саму статью?

Добрый день коллега!
Я прошу прощение за допущенную опечатку. Вместо MbCO в письме было написано MtHb. Еще раз прошу прощения.
Теперь о методе T.J. Siek and F. Rieders, я его постараюсь выложить на сайт.

При ГХ анализе какие колонки используете? Сходимость с ГХ и УФ какая?

ГХ исследование: "Хроматограф МХ, колонка 2 м, неподвижная фаза СаА-5А(0,25-0,5 мм), детектор - катарометр, газ-носитель - гелий, регистрация – программно-аппаратный комплекс Мультихром"
Аппарат достался в наследство, колонку сам не "набивал", поэтому особых тонкостей не знаю. Используется как дополнительное исследование, без количественного определения.

Доброго времени суток! Каково время анализа одной пробы с условием пробоподготовки? Проводите ли Вы при этом цветные тесты (формалин, танин)?

Добрый вечер!
Сама по себе ГХ пробоподготовка занимает не много времени, но мы сутки ее "выстаиваем". Цветные тесты я указывал: таннин и щелочь. Вообще мы готовим пробы на СФ и ГХ относительно общего гемоглобина.

Добрый день коллега! Как и обещал выставляю на сайт методику. Желаю удачи.

Добрый день коллега! Огромное спасибо Вам!
Эх, жаль, что сегодня не понедельник...

Кстати, пока искал методику T.J. Siek and F. Rieders, нашел много чего разного, в том числе и статью об определении HbCO по второй производной в коротковолновой области. Интересна тем, что определяются малые количества HbCO. На всякий случай выложу, может будет интересна Вам или кому еще.

Добрый день коллега! Если Вы внимательно прочитаете методику T.J. Siek and F. Rieders, то обнаружите, что этой методикой определяются и малые количества HbCO - около 1,5 % (реально методикой Букиной и Ушаковой, Гладышевской, определяется около 20%). Хотя в выше указанных методиках расчитана величина ошибки. Цитирую "..... величина ошибки карбоксигемоглобина в пределах концентраций от 3% до 20% составляет +-3%, при концентрации свыше 20% - +-5%." Как Они производили расчет мне не очень понятно, так как ниже 20% идет сглаживание спектра.
Что касается методики, которую Вы выложили, то она меня очень заинтересовала. Спасибо. С помощью второй производной, я проводил идентификацию наркотических и лек.веществ при слабо выраженных максимумах спектра. Правда это уже другой разговор. Выкладываю на сайт еще одну на мой взгляд
интересную методику ГЖХ для определения СО. Посмотрите. Желаю удачи.

Добрый вечер коллега!
По поводу определения низких концентраций HbCO: в большинстве своем точность определения, на мой взгляд, не играет большой роли для эксперта-танатолога - 5% или 4,5% HbCO дадим мы в своем заключении и наоборот 65% или 70% для постановки диагноза смертельного отравления СО. Точность определения будет играть большую роль для следственных органов в случае, курил ли перед смертью субъект или был курящим или был не курящим (как в методике J. Parks and H. G. J. Worth, где велось определение курящих и не курящих).
Спасибо за выложенную Вами методику по ГЖХ.

Точность определения будет играть большую роль для следственных органов в случае, курил ли перед смертью субъект или был курящим или был не курящим (как в методике J. Parks and H. G. J. Worth, где велось определение курящих и не курящих).

Работаю более 25-ти лет, а подобных вопросов от следователей не встречал ни разу!
Когда-то в конце прошлого века (то-ли в начале, то-ли в конце 80-х) слышал о постановке вопроса о возможности неадекватной реакции пилота вертолета вследствие содержания в крови COHb с концентрацией <5% (Насколько помню, шлепнулся вполне исправный МИ-2)

Добрый вечер!
В своем сообщении (пост №12) я излагал, так сказать мысли вслух, гипотетические рассуждения
Мне просто кажется, что определение НbСО в крови не должно сводится только для постановки диагноза смерти от отравления СО, что можно найти и другое применение. Я в свое время определял HbCO в крови из левого желудочка сердца и правого желудочка сердца, т.е. венозной и артериальной крови, с целью уточнить когда наступала смерть: вначале отравления или в конце. Вот допустим если определяется концентрация HbCO в крови у трупа в пределах от 15 до 30%, какой должен выставить диагноз танатолог?

Просто нормальные следователи, допустим, об этом не знают...

пожайлуста можете выложить метод Буиной, Ушаковой!?

Сорри, что так долго не отвечал. Вот сама статья...

... почему-то не могу прикрепить файл...

Уважаемые химики! Я работаю экспертом-танатологом. У нас возникла проблема: обнаружили труп в гараже в состоянии гнилостных изменений. Крови нет - сгнила. На алкоголь отправили мышцу (гнилую), хотя по ней степень опьянения не даем. А что делать с определением уровня СО. Наши химики сказали, что уровень СО только по крови делают. Есть ли какие-нибудь методики, напишите, пожайлуста.

На белом свете существует много разных методик: карбоксимиоглобина в мышце (Методические указания..., 1974 - хотя они и написаны в той части с существенной ошибкой); питерские коллеги (Бабаханян Р.В. со товарищи) в середине 80-х писали об определении COHb в костном мозге, который хорошо "переживает" гниение (например, Суд.-мед. эксперт., 1987, № 3, с.50-51), а также в пятнах сухой крови (по этому образу и подобию всегда можно сделать кровяные сгустки и свертки, например, из сердца)... Методике обнаружения COHb с помощью ГХ, в принципе, "фиолетово", что использовать: жидкую кровь или гомогенат мышцы. Да, пик выходит помегьше, но это не так страшно. Кстати, эта методика "работает" и тогда, когда спектральные исследования не удаются. У нас достаточно часто (к сожалению) на это исследование доставляются мышцы, в т.ч. и гнилые. Для спектрального обнаружения и определения делается вытяжка из гомогената (или сразу 0,1% раствором аммиака, или, лучше, водой, а после фильтрования подщелачивается), далее - как с кровью. Иногда проще повозиться с кровянистой жидкостью, что натекла из мышцы в банке. Желательно определять несколькими методами и усреднять результаты. Конечно, геморройно, но... COHb - достаточно устойчивое к гниению соединение.
Удачи вашим химикам!
А по поводу оценки полученной цифирки - если она вдруг выйдет - на худой конец всегда можно оценить только "качественно", как прижизненное воздействие, без уточнения степени отравления. Кстати, как здесь говорят - на "родственном" форуме (я понимаю, конкретика не приветствуется) в разделе "Токсикология" есть свежая методичка (2008) военных СМЭ по диагностике отравлений СО. Скачивается без проблем. Вполне возможно, она тоже "придется вам по вкусу".

еще раз попробую отправить уже в ворде, распозновалка не очень, но пнять смысл можно