Диффлизис

Полная версия: Диффлизис


Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Судебно-медицинская генетика
Pih
Уважаемые участники форума, спасибо Вам огромное, всегда шустро отвечаете, научите стремящегося методике диффлизиса 2 фракций с применением Chеlex-100,
пожалуйста.


Genetik
Цитата(Pih @ 12.11.2009 - 00:38)
Уважаемые участники форума, спасибо Вам огромное, всегда шустро отвечаете, научите стремящегося методике диффлизиса 2 фракций с применением Chеlex-100,
пожалуйста.

Дифлизис с Килексом? Плохая идея.


Зубр
Цитата(Pih @ 12.11.2009 - 00:38)
Уважаемые участники форума, спасибо Вам огромное, всегда шустро отвечаете, научите стремящегося методике диффлизиса 2 фракций с применением Chеlex-100,
пожалуйста.

Уважаемый 'Pih'!
Запрашиваемая Вами методика стала в последнее время весьма популярна. Есть куча статей, протоколов и даже книг, где этот метод исследуется и внедряется. На практике, он уже давно применяется. Прикрепляю протоколы сего касающиеся.

Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Успехов.


Genetik
Цитата(Зубр @ 13.11.2009 - 10:52)
Уважаемый 'Pih'!
Запрашиваемая Вами методика стала в последнее время весьма популярна. Есть куча статей, протоколов и даже книг, где этот метод исследуется и внедряется. На практике, он уже давно применяется. Прикрепляю протоколы сего касающиеся.

Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Успехов.

Особенно понравилась методика выделения ДНКи из косточек с помощью Килекса-100 с 30-ти минутной инкубацией при 56 градусах Цельсия. Писал явно теоретик, а не практик! Полный бред!!!


Pih
[На практике с волосами из расчесок и следами с зубных щеток часто получалось? Спасибо опять, угощу красным сухим правильным винои при встрече.


Pih
Дифлизис с Килексом? Плохая идея.
Это безусловно, но шанс, полагаю, есть, иногда надо быстро, хотя быстро хорошо не бывает, но мы не верим в приметы, а когда биоматериала много - почему нет?



Genetik
Цитата(Pih @ 14.11.2009 - 22:24)
а когда биоматериала много - почему нет?

А если мало?


Зубр
Цитата(Pih @ 14.11.2009 - 22:24)
Дифлизис с Килексом? Плохая идея.
Это безусловно, но шанс, полагаю, есть, иногда надо быстро, хотя быстро хорошо не бывает, но мы не верим в приметы, а когда биоматериала много - почему нет?

Уважаемый 'Pih'!
Идея может быть и плохая, но является запатентованной и давно реализована. Чтобы это не казалось пустыми словами прикрепляю статью, где проводят сравнение метода с килексом и другой новой разработки, коммерческого набора.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Успехов.


Genetik
Цитата(Зубр @ 15.11.2009 - 01:15)
Уважаемый 'Pih'!
Идея может быть и плохая, но является запатентованной и давно реализована. Чтобы это не казалось пустыми словами прикрепляю статью, где проводят сравнение метода с килексом и другой новой разработки, коммерческого набора.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Успехов.

Уважаемый Зубр! Спасибо за статью. Статья конечно интересная, но больше все-таки в для теоретических рассуждений о пользе Килекса. Дамочки в статье пишут, что они симулировали половые преступления, т.е. напихали в пробирку спермы и женских эпителиальных клеток и начали выделять Килексом. И - Das ist Fantastisch! Все получилось просто зашибись. Я Вам скажу, что со свежей спермой и эпителиальными клетками и Direct PCR без всяких проблем пойдет. А вот если бы эти уважаемые исследовательницы взяли бы ткань (например, трусы) с пятнами спермы годовалой давности (а у меня был прециндент - пятнам спермы 9 годков стунуло) и навытаскивали бы оттуда ДНКи с помощью Килекса. Вот тогда - снял бы я шляпу и поклонился бы им в ноженьки. А так: НЕ ВЕРЮ!!!
Кстати, когда я читал статью, меня больше интересовал вопрос: Где они сперму то брали?
С уважением.


N G
т.к. являюсь участником форму сравнительно недавно, то простите, но пишу в уже устаревшие темы. Хочется сказать, что у нас была экспертиза: сперма на трусах примерно 5-летней давности. Выделены объекты Килексом и получились чудесные четкие результаты!!

это не правило, не всегда получается, но Килексное выделение мы используем ОЧЕНЬ часто!!


rostandrei
Всем здравствуйте.
Не могу понять, при чём здесь "Челексом" или "не Челексом"???
Если я правильно понимаю, дифлизис необходим для того, чтобы отделить сперму от других ненужных клеток путём разрушения этих самых ненужных клеток. Так? И если после дифлизиса в пробе мы кроме спематозоидов ничего больше не наблюдаем (а для этого необходимо сделать препаратик), то выделяйте ДНК хоть валенком :-)).

Спасибо.


genetics
Поделитесь опытом пожалуйста, сколь лучше всего внести протеиназы К, чтобы дифлизис прошел успешно с первого раза (ну или со второго уж точно)? Объект - содержимое влагалища: много влагалищного эпителия с немногочисленными сперматозоидами. Очень хочется вытянуть чистую спермальную фракцию, чтобы не "вылазила" потерпевшая... Делала: 150 мкл лизирующего раствора (который из трис-HCl, NaCl, SDS, EDTA и воды) +16 мкл протеиназы К (20 мг/мл) на 50 мкл осадка. И как-то не до конца разделяется даже после второго раунда дифлизиса. Может что-то с протеиназой? или с головой? sad.gif
Заранее спасибо!


genosys
Цитата(genetics @ 8.04.2014 - 19:11)
Поделитесь опытом пожалуйста, сколь лучше всего внести протеиназы К, чтобы дифлизис прошел успешно с первого раза (ну или со второго уж точно)? Объект - содержимое влагалища: много влагалищного эпителия с немногочисленными сперматозоидами. Очень хочется вытянуть чистую спермальную фракцию, чтобы не "вылазила" потерпевшая... Делала: 150 мкл лизирующего раствора (который из трис-HCl, NaCl, SDS, EDTA и воды) +16 мкл протеиназы К (20 мг/мл) на 50 мкл осадка. И как-то не до конца разделяется даже после второго раунда дифлизиса. Может что-то с протеиназой? или с головой? sad.gif
Заранее спасибо!

Во-первых, абсолютно чистую спермальную фракцию получить не всегда возможно, да и не нужно (достаточно довести до >10% муж. ДНК в образце). Дело в том, что мужская ДНК при дифф. лизисе теряется и чем выше очистка, тем больше потери.
Во-вторых, у Вас что-то слишком много протеиназы, достаточно раза в 3 меньше (слишком много постороннего белка очистке тоже не способствует).
В-третьих, на такой объем осадка буфера надо бы раза в 2-3 больше брать (перегруз материалом -> хуже очистка).
Ну и наконец, если есть возможность, пользуйтесь промеговским Differex'ом. Он дает наилучший результат: http://www.investigativegenetics.com/content/2/1/11


genetics
Цитата(genosys @ 9.04.2014 - 12:35)
Во-первых, абсолютно чистую спермальную фракцию получить не всегда возможно, да и не нужно (достаточно довести до >10% муж. ДНК в образце). Дело в том, что мужская ДНК при дифф. лизисе теряется и чем выше очистка, тем больше потери.
Во-вторых, у Вас что-то слишком много протеиназы, достаточно раза в 3 меньше (слишком много постороннего белка очистке тоже не способствует).
В-третьих, на такой объем осадка буфера надо бы раза в 2-3 больше брать (перегруз материалом -> хуже очистка).
Ну и наконец, если есть возможность, пользуйтесь промеговским Differex'ом. Он дает наилучший результат: http://www.investigativegenetics.com/content/2/1/11

Спасибо огромное! Дифферекс есть, но пока не пробовали... Надо будет с ним поэкспериментировать... Просто билась-билась с дифлизисом именно с этим объектом... все равно смесь sad.gif не стала уже дальше доочищать дабы вообще сперматозоиды не потерять... придется смесь давать. Плюс Y-filer'ом поставила - чистенько получился. Вместе, думаю, достаточно будет...


genosys
Цитата(genetics @ 9.04.2014 - 20:26)
Просто билась-билась с дифлизисом именно с этим объектом... все равно смесь sad.gif не стала уже дальше доочищать дабы вообще сперматозоиды не потерять... придется смесь давать. Плюс Y-filer'ом поставила - чистенько получился. Вместе, думаю, достаточно будет...

Это нормально, см. статью по ссылке (доступ открытый). Там тоже в одном из образцов чистую мужскую ДНК выделить не удавалось в разных лабах и разными методами. Дело индивидуальное, зависит от образца, можете себя не винить wink.gif


Русская версия Invision Power Board © 2001-2017 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!