определение метфермина(глюкофажа)



Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Аналитическая и судебная токсикология
chemy
У кого-нибудь была экспертиза по отравлению препаратом "Глюкофаж"? Не могу подобрать условия определения методом ВЭЖХ. Поделитесь, пожалуйста.


Deminolog
Хм... Если Вы выложите сюда хроматограмму, условия элюирования, параметры системы (температура термостата, какая колонка - сорбент, размер зернения, длина, толщина, скорость потока), наименование прибора (дабы знать, в каких пределах рабочих параметров мы зажаты. Милихром не даст нам играть с потоками, например, термостата нет у него... Там только подвижная фаза). то может смогу помочь, хотя бы исходя из классических представлений о ВЭЖХ. Ну и где примерно сидит аналит на хроматограмме smile.gif Я так понимаю, речь идет о ВЭЖХ-УФ? Если да - то какая аналитическая длина волны была выбрана?


chemy
Цитата(Deminolog @ 18.05.2012 - 00:06)
Хм... Если Вы выложите сюда хроматограмму, условия элюирования, параметры системы (температура термостата, какая колонка - сорбент, размер зернения, длина, толщина, скорость потока), наименование прибора (дабы знать, в каких пределах рабочих параметров мы зажаты. Милихром не даст нам играть с потоками, например, термостата нет у него... Там только подвижная фаза). то может смогу помочь, хотя бы исходя из классических представлений о ВЭЖХ. Ну и где примерно сидит аналит на хроматограмме smile.gif Я так понимаю, речь идет о ВЭЖХ-УФ? Если да - то какая аналитическая длина волны была выбрана?


Прибор "Милихром А-02", работаю на длинах волн 210, 220,230, 240,250,260, 280 и 300 нм, пробовала два варианта элюентов 1).Элюент А 0,1% раствор трифторуксусной кислоты, элюент В -ацетонитрил, 2) метанол 100 %, поскольку у Clarka спектр метформила представлен в метаноле. Градиент элюента В от 2 до 100 % за 3000 мкл, скорость потока 150 мкл/мин., температура термостата колонки 35-40 град. Колонка 75х2 мм, фаза Prontosil 120-5C-18, зернение 5 мкм. Исходя из данных Clarka, максимум поглощения метформина в метаноле при длине волны 236 нм, то могу предположить, что на хроматограмме метформин выходит маленьким пиком (площадь пика 0,8 Auxмкл - и это раствор таблетки примерно 1/4 в 1 мл метанола)с временем удерживания 2,88 мин (спектр имеет максимум поглощения 234 нм). Снимала метанольный раствор метформина и раствор в 0,1 н р-ре солянки на спектрофотометре - спектра не вижу!


Deminolog
А хроматограмму? Судя по времени удерживания, компонент практически не удерживается... Что мешает определению, количество пиков, форму пика можно увидеть только по хроматограмме... Условия есть - уже хорошо... Хроматограмму в виде картинки сбросьте, пожалуйста... Мы ж не экстрасенсы, количество компонентов не видим smile.gif


chemy
Да, если это действительно метформин, то практически не удерживается и очень низкая чувствительность, при хроматографировании в изократическом режиме, далее 2-х минут хроматограмка пустая.


Deminolog
Температуру понижайте до 30 градусов. Разброс в 5 градусов (35-40) не пойдет. Поверьте опыту, 5 градусов - это очень много. Если Вы не против, я бы хотел параллельно с ответом внести еще пару уточнений/рекомендаций:
1) Температуру советую понизить до 30. При этом контролируйте строго. Плюс-минус 5 градусов (35-40), это большая разница. При понижении температуры у Вас увеличиться время удерживания. Это обусловлено тем, что меняется вязкость Вашего элюента. Изменятся все времена удерживания, но я не думаю, что пик не будет разрешен. Сейчас же пик вполне разрешен. Вопрос только в том, что точно ли это аналит? Стандарт есть?
2) Линия через всю хроматограмму - это профиль градиента, как я понимаю? Но обратите внимание на то, что у Вас нет возврата к исходному элюенту. А это неправильно с точки зрения хроматографии. Поясню свои слова: в жидкостной хроматографии в каждый момент времени устанавливается динамическое равновесие. Поэтому для достижения максимальной воспроизводимости рекомендуется заканчивать программу всегда также, как она начинается. При этом регенерация - это где-то 2-3 объема колонки.
По самому градиенту: нет надобности уходить в очень сильный элюент, как я вижу. Т.е. все компоненты у Вас элюируются при 60% по объему сильного элюента. Кстати, здесь ацетонитрил или метанол? Вопрос принципиальный, поскольку у них разная элюирующая сила. Ацетонитрил сильнее намного, чем метанол. Кроме того, он более прозрачен в области 210 нм.
Изократика в каком по составу элюенте была? Два варианта - все могло просто вылететь не удерживаясь и все, если был сильный элюент, либо вышло только то, что не удерживается и все.

Значит еще один момент - Вы загрубили детектор или нет? Проверьте в настройках...

Итого: мой вариант для Вашей задачи, чтобы изменить картинку хроматограммы...
1) Программа элюирования: 90 буфера : 10 сильного элюента (метанол или ацетонитрил, что было по Вашей хроматограмме) 2 минуты. Потом за 2 минуты до 70:30, плато 3 минуты на ступени, потом за 5 минут идете к 30:70, плато на ступени 3 минуты, потом за 4-5 минут возвращаетесь на элюент первой ступени, плато на этом элюенте 4 минуты. Все параметры берутся с запасом, можно будет потом обрезать лишнее. Аналит искать на 2 ступени, ориентировочно... Но надежнее - по соотношениям спектральным.
2) температура - 30, либо 35 градусов (строго, без разброса в 5 градусов).
3) программу 2 раза запустить по программе в холостую, чтобы пришла в равновесие. Перед холостыми запусками на 4-5 минут на элюенте первой ступени пусть постоит для верности. Холостой запуск - вкол воды. Дистиллированной воды. Увидите заодно, нет ли артефактов каких...
4) как получите хроматограмму - дайте посмотреть smile.gif
5) Колонке для установления температуры (она прогреться и внутри должна) дайте минут 15. Можете холостые погонять в это время, нормально будет.

Но если регенерации элюентом первой ступени нет - эта мягкая программа элюирования может и не помочь. Как сделаете - выложите картинку, пожалуйста, тогда будет намного проще искать ответ, если не получится эффективно разделить. Был бы препарат под рукой - сделал бы на своем хроматографе...
Были бы из одного города - с удовольствием бы помог лично, а не по форуму... Самому как-то проще все делать, чем через форум пытаться решать задачи)))


chemy


Deminolog
Так это ж существенно меняет дело smile.gif Вы прям обрадовали smile.gif Тогда внесу поправку в свое сообщение: не 90:10 начинайте, а 95:5, плато, потом резко переходите на 70:30. Пусть сначала выйдут компоненты, которые не удерживаются на колонке. А потом за счет достаточно высокой элюирующей силы выскакивает аналит. У Вас хорошо разделились компоненты, если это Вы уверены, что на 2.71 - Ваш аналит. Просто он вышел на хвосте остальных пиков, а эта ступень должна избавить Вас от хвоста, тогда, соответственно, несколько вырастет и сам сигнал, базовая-то ниже станет.
До комнатной - не надо. Пик размажет. 30 либо 35. 0,5 минуты довольно солидная разница. Просто добавьте ступень градиента... Если результат понравится - увеличивайте скорость потока, если это реально, пик станет уже, просто поправите градиент в соответствии со скоростью потока. Увеличите скорость анализа


Русская версия Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!