Увадаемая 'Sone4ka'!
Цитата(Sone4ka @ 7.09.2012 - 20:49)
Почему праймеры, а не ДНК? Как бы по-вашему выглядела плохо почищенная ДНК? и что скажете, что в одной экспертизе такого нет, а в другой есть и те же праймеры, из того же пизирька, и условия те же, что при выделени, при постановке ПЦР, при форезе. Может, меняются какие-то нюансы, но не могу понять, что конкретно и когда, мозг сломала. Хочется конкретики, и одинаковых по качесвту экспертиз. Может вы сталкивались с этим?
P.S.нюансы: программа пцр стационарная
Нюансы - великое дело. При том, что Вы работаете с готовыми наборами и, следовательно, не должны менять требования инструкции к наборам - остаётся только несколько моментов, которые следует проверять (варьировать). 1. Экстракция ДНК, её очистка и степень интактности конечного препарата. 2. Тщательная (RT-PCR) проверка концентрации ДНК и наличия/отсутствия ингибиторов. Далее, действия по инструкции, руководствуясь цифрами и фактами, полученными при анализе готовности ДНК к амплификации (п.1 и п.2).
Честно говоря, полосы наверху меня лично вообще мало смущают. Ну есть они в запредельной для данной системы зоне, и пусть там живут. То, что находится в зоне леддера хотелось бы устранить, скорее всего, снизив вносимое количество ДНК в амплификацию. Также не оптимальная амплификация наблюдается в дорожке, расположенной следующейпосле первых леддеров - вес статтера слишком велик. Ещё - не очень просто разбираться с "половинками" аллелей (дорожка перед последними леддерами). Но тут ничего не попишешь - ПААГ.
Удачи.