Пробоподготовка биопроб для ВЭЖХ



Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Аналитическая и судебная токсикология
Nadezhda64
Добрый день!

Извините, если не совсем в тему форума. Очень прошу помощи.

У нас лаборатория университетская, к криминалистике отношения не имеющая. Есть оборудование (в частности, жидкостной хроматограф Shimadzu LC-20), есть два сотрудника почти без опыта работы на хроматографах и есть задача определить аминокислоты в биообъектах (моча, плазма), которую поставили медики, работающие над диссертацией.
Методики для определения аминокислот-то мы некоторые нашли, но в комбикормах и т. п. Там все проще несколько.

Помогите, пожалуйста, с пробоподготовкой. Хроматограф стоял неприкаянный несколько лет. Только-только начали его осваивать. Очень боюсь убить колонку.

Доступна для использования древняя центрифуга с максимальным числом оборотов в минуту 8000. Достаточно ли это для осаждения белков и других компонентов, которые могут навредить колонке? В литературе встречала 10-13 тысяч оборотов плюс твердофазную экстракцию.

Можно ли обойтись без последней?

Насколько критично для колонки наличие большого количества хлорид-анионов в данных биообъектах?




Deminolog
Добрый день.
Белок центрифуга не осадит так, как надо. Для осаждения белка из плазмы и мочи необходимо применять разбавитель, в состав которого обязательно будет входить что-то типа ацетонитрила. Желательно, чтобы ацетонитрила было примерно 50% в составе разбавителя. Я обычно еще подкисляю пробы муравьиной кислотой (совсем немного, 0,1%).
Центрифугировать можно и при 8 тыс оборотов, просто чуть больше, чтобы выпавший белок надежно осадить, потом аккуратненько собираете супернатант, чтобы не захватить белок, и вкалываете. Какой у Вас детектор в наличии? От этого многое зависит. Начиная от состава ПФ, заканчивая составом экстрагента, а также необходимостью ТФЭ.
В общем случае работать без ТФЭ можно. С мочой проблем меньше, чем с плазмой, сразу говорю.
В любом случае на колонку поставить предколонку, следить за давлением. Начинает расти - меняем, никак иначе.
Откуда Вы? Может быть смогу помочь. Я сам из университета, работал как на Шимадзу 20-ках, так и на Термо (ныне и работаю).
Если не хотите писать на форуме - пишите на почту. TemerdashevAZ@gmail.com


Nadezhda64
Цитата(Deminolog @ 31.10.2013 - 13:24)
Какой у Вас детектор в наличии?


У нас диодная матрица SPD-M20A.


alexlp
http://www.econova.ru/applications/publica...n_example_8.pdf
http://www.econova.ru/applications/publica...n_example_1.pdf
http://www.econova.ru/applications/publica...technique_2.pdf


Deminolog
Да, как вариант. Все легко адаптируется. Просто нужно приобрести культуру работы с ВЭЖХ.
Уважаемая Надежда, сейчас отправлю Вам на почту небольшое письмо, по поводу некоторых трудностей работы с биожидкостями.


Nadezhda64
Большое спасибо всем!


Русская версия Invision Power Board © 2001-2019 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!