Идентификация метаболитов AM-2201 и THJ-2201



Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Аналитическая и судебная токсикология
Korvet
вот что у меня получилось по АМ-2201 (indazol)
Нажмите для просмотра прикрепленного файла

под названием AM(indazol)-2201-C5-chain-OH-TMS
я понимаю продукт присоединения гидроксила к С5Н9F цепочке скорее всего лезет именно в алкильную цепь,так как везде ион есть 271 (у людей эта группа метаболитов пока не выявлена, правда пока был всего 1 образец)

наибольшую дискуссионность вызывает укорочения цепи до аналога JWH-073 (то есть получается JWH(indazol)-073-4OH), я честно говоря не знаю как это можно еще либо доказать либо опровергнуть. Все основные ионы в этом пике имеют мс-мс спектры, подтверждающие их причастность к первоначальному веществу.


для традиционного АМ-2201 я наблюдал аналогичный метаболит, опознанный по библиотеке с данного форума
Нажмите для просмотра прикрепленного файла


KSS17
Здравствуйте!
Вот вариант.Нажмите для просмотра прикрепленного файла


alexlp
Цитата(KSS17 @ 22.02.2014 - 17:23)


356 все одно выпадает. Это МИ-60.

Я предполагаю, что в данном случае имеет место наложение спектров и артефакты деконволюции.

Если в ручном режиме "деконволюзировать" спектр в этом диапазоне времен по моделям 127, 155,271 и 285, то этот спектр распадается на два.
Если мы строим модель по 285 иону (это 1-methyl-1H-indazol-3-yl](naphthalen-1-yl)methanone) - мы теряем 271 и 127 ионы, т.е. основную, базовую структуру.

Если же строим модель по 271 иону, то получаем нечто из ряда Pregnan-11-one.

Это мое ИМХО, я могу ошибаться.


Korvet
ну может и так, почему нет...в любом случаем имеем отгрызание части цепи, не всей а именно части...ну и наверное предложенное Вами соединение все равно должно образоваться через стадию 073-гидрокси, нет?

есть идеи как можно проверить гипотезу? провести иную дериватизацию?это уже когда новый образец появиться


Korvet
alexlp, Вы и правы и нет, дело в том что там 271 ион, он как бы с плечом, вот в хвосте и прячется наше соединение, у него и 271 ионы и 285 имеют аналогичный спектр мс-мс с нативным веществом, я же уже отвечал Вам об этом, даже картинки слал мс-мс фрагментации...

это во первых, во вторых аналогичная картинка и для АМ-2201, хроматограмма с которой сделан скриншот, она выложена на этом форуме...можете сами глянуть, там вместо 271, 270 ион


KSS17
Здравствуйте!
Цитата(Korvet @ 22.02.2014 - 17:49)
...
есть идеи как можно проверить гипотезу? провести иную дериватизацию?это уже когда новый образец появиться


Варианты дериватизации попробовать (можно последовательно).
1. Метилирование, затем БСТФА
2. Ацетилирование, затем БСТФА

Соответственно спиртовая группа не будет метилироваться, карбокси даст метиловый эфир и с БСТФА уже не будет реагировать.


Korvet
да, спасибо, так и планировал, но когда образец новый появиться...щас не с кем эксперименты ставить


alexlp
Цитата(Korvet @ 22.02.2014 - 17:56)
alexlp, Вы и правы и нет, дело в том что там 271 ион, он как бы с плечом, вот в хвосте и прячется наше соединение, у него и 271 ионы и 285 имеют аналогичный спектр мс-мс с нативным веществом, я же уже отвечал Вам об этом, даже картинки слал мс-мс фрагментации...

это во первых, во вторых аналогичная картинка и для АМ-2201, хроматограмма с которой сделан скриншот, она выложена на этом форуме...можете сами глянуть, там вместо 271, 270 ион


Да, по АМ2201 спектр гомогенный, но точно там в исходном не было примеси 073го? И в этот спектр отлично вписывается в предложенную KSS17 структуру. У Вас есть еще образец с АМ2201? Попробуйте сперва его передиватизировать.


Korvet
спасибо за идею с образцом АМ-2201, будет сделан завтра, я все равно хотел получать более чистый экстракт

во вложении та самая картинка по мс-мс, теперь с хроматограммкой http://yadi.sk/d/I_TPIixOJMG76

а здесь
http://yadi.sk/d/wylZy41wJFxNM
подтверждение предположения о карбокси метаболите xlr-11


marko
Здравствуйте!
Посмотрите пожалуйста хроматограмму (1377met). Как всегда в моем случае щелочной гидролиз с последующим метилированием. Думаю, по теме вашего разговора. Обращают на себя внимание два пика, на 22,3 минуте (127, 155, 271, 285, 357) и на 26,7 минуте (127, 155, 271, 285, 386).


Korvet
спасибо, конечно очень в тему!

первый мне так кажется продукт дегидратации моногидрокси метаболита,

360+16-18=358

либо тот самый что предположил KSS (416-73+15=358)

второй похож на метиловый эфир карбокси

только судя по соотношению М\М-1 здесь может быть бензимидазольный аналог а не индазольный


alexlp
Цитата(Korvet @ 22.02.2014 - 22:12)
спасибо, конечно очень в тему!

первый мне так кажется продукт дегидратации моногидрокси метаболита,

360+16-18=358

либо тот самый что предположил KSS (416-73+15=358)

второй похож на метиловый эфир карбокси

только судя по соотношению М\М-1 здесь может быть бензимидазольный аналог а не индазольный


Отличная хроматограмма! Основной 5-гидрокси (дефторированный) на 22.3561 и 5-карбокси на 26.7717 метаболиты! Спасибо! И как раз решился вопрос о 355 и 371 ионах!


Korvet
а уверены насчет 5-гидрокси? просто немного странно, по идее соединение должно обладать низкой летучесть, а пик очень большой, и давать хотя бы небольшой артефакт дегидратации, 358-18, но его нету...хорошо бы конечно проверить эту версию реакцией с предполагаемым гидроксилом


KSS17
Здравствуйте!
Цитата(Korvet @ 22.02.2014 - 22:55)
а уверены насчет 5-гидрокси? просто немного странно, по идее соединение должно обладать низкой летучесть, а пик очень большой, и давать хотя бы небольшой артефакт дегидратации, 358-18, но его нету...хорошо бы конечно проверить эту версию реакцией с предполагаемым гидроксилом


Да, проверить определенно надо. Если не будет сдвига с БСТФА, это 3-карбометокси...


alexlp
Цитата(KSS17 @ 22.02.2014 - 23:17)
Здравствуйте!
Да, проверить определенно надо. Если не будет сдвига с БСТФА, это 3-карбометокси...


Еще раз убеждаюсь - не говори Гоп, и в споре рождается истина!
Мы все трое ошибались, но ошибаясь постепенно приходим к истине.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Это, похоже, то, что Корвет интерпретировал сперва как гидрокси-JWH073(N), а затем мы пытались интерпретировать как 5-гидрокси-THJ2201 нативный.
Но в данном случае спектр гомогенный и интенсивный. Индекс - 3313.
И характерный фрагмент - 129 da - видимо как раз C2COOSi(CH3)3.
Это ТФЭкстракты из кислотных и щелочных гидролизатов, посадка на сорбент при pH=6. Видимо при ТФЭ удалось отделить это соединение от прегнанов, да и концентрация значительно выше, с претензией на основной метаболит...
Уважаемый Корвет! Я был не прав!


Korvet
почему все трое, KSS то прав оказался, то есть это 3-карбокси получается все же?
вообще что еще можно из этого сказать такой метаболит для структур с С5Н9F хвостом еще ни кем кроме нас не был замечен...

кстати ион 129 это какой-то фрагмент из базовой структуры. так как при фрагментации иона 285 почти при любой энергии с большим выходом получается 129

похоже у Вас образец с очень хорошей концентрацией. попробуйте поискать метаболиты описанные в статье по АМ-2201, то есть дигидродиол например, с моногидрокси (без дефторирования) я так понял мы пролетаем...


KSS17
Здравствуйте!

Выводы всегда определяются объемом доступной информации.
Я бы всё равно ещё бы проверил в последовательном режиме метилирование и ТМС (метилированная проба наверное ещё сохранилась).
У меня по состоянию колонки гидрокси определяются не сложно, хвостят... smile.gif Но чтоб достоверно это подтвердить делаем после метилирования ацетилирование и ТМС. Это позволяет надежно выявлять функциональные группы, без гадания...


alexlp
Цитата(KSS17 @ 23.02.2014 - 11:27)
Здравствуйте!

Выводы всегда определяются объемом доступной информации.
Я бы всё равно ещё бы проверил в последовательном режиме метилирование и ТМС (метилированная проба наверное ещё сохранилась).
У меня по состоянию колонки гидрокси определяются не сложно, хвостят... smile.gif Но чтоб достоверно это подтвердить делаем после метилирования ацетилирование и ТМС. Это позволяет надежно выявлять функциональные группы, без гадания...


Да, несомненно нужно просилировать и ацилировать метилированные пробы. Но это - в понедельник.

Те силированные пробы, что я выложил, делались для других целей и не просматривались первоначально "с пристрастием". А надо было! Лично я, в этой ситуации, столкнулся с эффектом "шаблонного мышления" и по новому взглянул на многое.

Уважаемая Marco! А у Вас будет возможность дополнительно поработать с вашими пробами?


Korvet
для мочи с метаболитами АМ-2201, сперва сделал ацетилирование, потом силирование, в итоге имеем вещество с мол. массой 415, по спектру похожее на ЖВХ-073-ОН, правда остальные метаболиты куда-то пропотерялись...так что решаем? 3-карбокси?


alexlp
Цитата(Korvet @ 23.02.2014 - 18:32)
для мочи с метаболитами АМ-2201, сперва сделал ацетилирование, потом силирование, в итоге имеем вещество с мол. массой 415, по спектру похожее на ЖВХ-073-ОН, правда остальные метаболиты куда-то пропотерялись...так что решаем? 3-карбокси?

Спектр в студию!


Korvet
http://yadi.sk/d/DViyMz6cJPzCZ

19.04 мин

сперва АС затем Si


alexlp
Уважаемый Корвет!

Я попытался нарисовать картинку на основании вашей старой хроматограммки АМ2201
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Было бы интересно посмотреть вторичную фрагментацию 144 фрагмента в АМ2201 и 129 фрагмента в индазольном варианте. Хотелось бы понять, почему по разному идет фрагментация в алкильном хвосте индольного и индазольного аналога?


KSS17
Здравстуйте!

144 это индол-3-карбонильный фрагментный ион, в индазолах это 145.
Различие определяется вопросом стабилизации образующегося иона, в индоле выгоднее получить два шестичленных цикла (с включением метиленовой группы), в индазоле хватает электронных пар двух азотов и алкильный хвост просто отваливает. Можно поразвлекаться квантово-химическими расчетами, расчет энергии образования ионов будет вцелом соответствовать реалям фрагментации.


alexlp
Цитата(KSS17 @ 23.02.2014 - 20:50)
Здравстуйте!

144 это индол-3-карбонильный фрагментный ион, в индазолах это 145.

Так ведь нет 145го в спектре индазольного аналога. ?


KSS17
Здравствуйте!

Есть, выражен для THJ2201 слабо, но есть.


alexlp
Для THJ2201 - не спорю - есть. Я говорю про THJ2201 с обрубленным хвостом, которым мы сейчас рассматриваем. Не исключаю, что ион мог и потеряться в результате деконволюции. Но может быть попробовать пощупать их на МС/МС для подтверждения? Хотелось бы иметь еще один пруф того, что хвост отвалился...


Korvet
индазол штука хитрая...все зависит от окружения. в карбоксамидах есть 145 ион, в кетонах типа THJ его почти нету, для наших грязных спектров он мог и вовсе выпасть в ходе очистки.

индазольные собратья любят выбрасывать мостиковую СО, для индольных такое не замечено...

144 ион это стопудовски индол+метил, а 129 в случае индазола, это какой-то обрывок индазольного ядра (может без парочки протонов просто)...я конечно могу это проверить не проблема, все упирается во время...прибор-то не у меня на работе, так что придется подождать...


marko
Здравствуйте!
Просилировали метилированную пробу 1377 о которой говорилось выше.


Korvet
marko, спасибо большое!
то есть что мы видим, вещество способно как силироваться так и метилироваться. значит это кислота, ведь спирты в этих условиях не метилируются, так? значит 3-карбокси все же похоже, то есть KSS прав оказался!


marko
Здравствуйте!
Посмотрите пожалуйста хроматограмму. На 25,5 (127, 155, 270, 357) и на 32,2 (127, 155, 270, 385) минутах предположительно спектры метаболитов АМ2201 как у Korvet, но в метилированном варианте.


A58
Цитата(marko @ 28.02.2014 - 12:48)
Здравствуйте!
Посмотрите пожалуйста хроматограмму. На 25,5 (127, 155, 270, 357) и на 32,2 (127, 155, 270, 385) минутах предположительно спектры метаболитов АМ2201 как у Korvet, но в метилированном варианте.


Конечно, на 25,5 гидрокси-метаболит не дериватизированный, а на 32,2 метиловый эфир 5-карбокси метаболита АМ2201. Однако у Вас в пробе гораздо больше метаболитов XLR-11 - 16.80; 18.34 и 18,70 мин. Пики просто огромные. Возможно есть еще метаболиты, надо покопаться.


marko
Спасибо за ответ!
Про XLR11 знаю, последнее время он встречается с завидной регулярностью. АМ 2201 увидели впервые.


Korvet
есть мнение что 25.5 это не гидрокси, а все же С2-СООН, так как это вещество не ацетилируется, но силируется. об этом чуть выше писалось уже...или у Вас есть иные экспериментальные данные?


A58
Цитата(Korvet @ 28.02.2014 - 16:21)
есть мнение что 25.5 это не гидрокси, а все же С2-СООН, так как это вещество не ацетилируется, но силируется. об этом чуть выше писалось уже...или у Вас есть иные экспериментальные данные?


Меня смущает масса М-17 (340), обычно наблюдающаяся у гидрокси- метаболитов, хотя эксперимент штука упрямая, возможно я не прав.


alexlp
Цитата(A58 @ 28.02.2014 - 20:33)
Меня смущает масса М-17 (340), обычно наблюдающаяся у гидрокси- метаболитов, хотя эксперимент штука упрямая, возможно я не прав.

Вро де бы и МИ должен быть 356 (если по аналогии с THJ2201)...Будем просить уважаемую Marko повторить с силированием...


Korvet
M-17 - эта свойство и самого ЖВХ-018, там кислород кетонной группы уходит с протоном из нафтила...
для данного случая я бы попросил марко сделать вкол сперва без метилирования, а потом провести метилирование и снова вколоть. эксперимент лишним не бывает. тем более в этом случае. метаболит все же спорный, частичное отгрызание алкильного хвоста еще вроде никто не фиксировал.


marko
Обязательно все сделаю! smile.gif Но уже через денек! Единственное, повторюсь, BSTFA у нас без активатора. С метилированием проблем нет. И хотелось бы уточнить, какой гидролиз предпочтительнее ( в моем случае был щелочной) или в данном случае это не имеет значения?


Korvet
наверное проще было бы силировать ваш метилированный образец чтобы уже экстракцию повторно не делать...если в пробе есть недозакрытая ОН группа, она прореагирует с ТМС...

alexlp, МИ должне быть 357, ведь речь об АМ-2201

359-19-14+16-2+16+15=357

19-фтор
14-метилен
17-кислород
2 - Н2
15-метил


alexlp
Цитата(Korvet @ 28.02.2014 - 21:24)
наверное проще было бы силировать ваш метилированный образец чтобы уже экстракцию повторно не делать...если в пробе есть недозакрытая ОН группа, она прореагирует с ТМС...

alexlp, МИ должне быть 357, ведь речь об АМ-2201

359-19-14+16-2+16+15=357

19-фтор
14-метилен
17-кислород
2 - Н2
15-метил

Для THJ2201 вроде бы самый интенсивный ион ММ-1=357, соответственно для АМ2201 должен быть 356.


Korvet
alexlp, Вы спектры АМ-2201 и THJ2201 сопоставьте. Для АМ-2201 вообще не характерно образование дуплетов М\М-1, там просто 359 и изотопный пик. а вот для индазольного и бензимидазольного аналога наблюдаются М-1, притом для индазольного как раз М больше чем М-1, для бензимидазольного - наоборот!

для метаболитов аналогичная картина


alexlp
Цитата(Korvet @ 22.02.2014 - 22:55)
а уверены насчет 5-гидрокси? просто немного странно, по идее соединение должно обладать низкой летучесть, а пик очень большой, и давать хотя бы небольшой артефакт дегидратации, 358-18, но его нету...хорошо бы конечно проверить эту версию реакцией с предполагаемым гидроксилом

Вы это писали неделю назад. А сейчас явный отстрел воды есть. Я думаю - надо проверять.


Korvet
Цитата(alexlp @ 1.03.2014 - 12:00)
Я думаю - надо проверять.


да я так вообще всегда думаю. теоретизирвоать можно много, главное это экшпримент!

кстати готовится статья по метаболитам АМ(N)-2201, в "бутлеровских сообщениях"...вкратце говорил с одним из автором, они-то нашли фторсодержащие метаболиты...почему же на наших хр-мах их не прослеживается(кроме опарышей)...малая доза? неудачное время взятия проб?


alexlp
Уважаемые Коллеги!

Интересный случай:
Component at scan 1078 (11.244 min) [Model = +189u] напоминает индазольный аналог 5-фторпентилиндольной кислоты-метиловый эфир.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Учитывая, что в щелочной фракции обнаруживается 8-оксихинолин, можно предположить исходным соединением 5F-THJ
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
https://www.caymanchem.com/app/template/Pro...m/catalog/14890

Каково Ваше мнение?


KSS17
Здравствуйте!
Этот метаболит так же характерен и для 5-F-AB-PINACA, но не является там основным.


alexlp
Цитата(KSS17 @ 3.03.2014 - 12:45)
Здравствуйте!
Этот метаболит так же характерен и для 5-F-AB-PINACA, но не является там основным.

А Вы видите там метаболиты 5-F-AB-PINACA? Вопрос то принципиальный. Если это THJ - нет ответственности, Если 5-F-AB-PINACA - то административка. И куда девать хинолин тогда?


KSS17
Здравствуйте!
Во фторированной АБПИНАКЕ данный метаболит в миноре. Здесь он основной. Новодел какой-нибудь.


alexlp
Цитата(KSS17 @ 3.03.2014 - 13:08)
Здравствуйте!
Во фторированной АБПИНАКЕ данный метаболит в миноре. Здесь он основной. Новодел какой-нибудь.

Вы думаете это не THJ?


KSS17
Здравствуйте!
Если ничего более нет, то это может оказаться индазольным аналогом 5F-PB-22.


alexlp
Цитата(KSS17 @ 3.03.2014 - 13:55)
Здравствуйте!
Если ничего более нет, то это может оказаться индазольным аналогом 5F-PB-22.

Не спорю, но из того, что описано сейчас - мне кажется более всего подходит THJ. Да и в мэйнстриме. Вы считаете он не может так разваливаться? Как его сейчас обозвать?

Предлагаю такой набор:
Name: 5F-THJ-M marker, methyl-
Formula: C14H17FN2O2
MW: 264 Exact Mass: 264.127405
Synonyms:
1.methyl 1-(5-fluoropentyl)-1H-indazole-3-carboxylate
2.5F-AB-PINACA -M, methyl-
3.5F-PB-22(N) -M, methyl-


Korvet
alexlp, а как из Вашей стр-ры хинолин-то нарисуется? Вы же рисуете амид кислоты. а не эфир 8-оксихинолина. так что если 8-окси в образцах, и Ваш спектр метильный. то KSS17 наверное все же прав (с индазольным аналогом 5F-PB-22.)...


alexlp
Цитата(Korvet @ 3.03.2014 - 15:02)
alexlp, а как из Вашей стр-ры хинолин-то нарисуется? Вы же рисуете амид кислоты. а не эфир 8-оксихинолина. так что если 8-окси в образцах, и Ваш спектр метильный. то KSS17 наверное все же прав (с индазольным аналогом 5F-PB-22.)...

Ну как бы 2 молекулы воды - и получаем оба продукта и аммиак. Но как оно на самом деле?
А были случаи изъятия MN-18 или хинолинового карбоксамида AM2201? Если да, то что там обнаруживается? Мне, помнится, говорили криминалисты, что попадался какой то хитрый хинолин не известный...


KSS17
Здравствуйте!

Вероятность THJ низка. Памятные АПИНАКА и АПИКА (не путать с АБешками) были амидами и гидролиз амидной связи там не проходил по причине стерики даже в жестких условиях, так же и в организме шанс гидролиза мизерный.

Потрясите Ваших криминалистов, хоть бы на спектры. smile.gif


alexlp
Цитата(KSS17 @ 3.03.2014 - 23:23)
Здравствуйте!

Вероятность THJ низка. Памятные АПИНАКА и АПИКА (не путать с АБешками) были амидами и гидролиз амидной связи там не проходил по причине стерики даже в жестких условиях, так же и в организме шанс гидролиза мизерный.

Потрясите Ваших криминалистов, хоть бы на спектры. smile.gif


Потрясу послезавтра - заберу все нерасшифрованные спектры. Кстати, опять два случая отличных THJ2201, определяются два карбоксилированных метаболита.
В организме есть ферментная система для гидролитического дезаминирования. Может быть в случае с АПИНАКой и АПИКОЙ этот массивный наболдашник просто мешал?
Хотя, если вспомнить недавнюю находку чего то, типа PB22F с нафтолом?, то можно предположить, что идет испытание новой линейки на основе комбинации имеющихся компонентов.. Но почему - у нас?


А может это какие то конструкторы "сделай сам"? Как с УРами?


Korvet
Цитата(alexlp @ 3.03.2014 - 20:07)
Ну как бы 2 молекулы воды - и получаем оба продукта и аммиак. Но как оно на самом деле?


вот как угодно только не так. Амид может гидролизоваться до кислоты и амина, но никак не до кислоты и до спирта (в данном случае фенола). если вы считаете что фенол образуется из амина, который образовался при гидролизе, то тогда и сам амин тоже должен быть в БЖ, потому что достаточно полярное вещество и выводится вполне может сам. Это одно, ну а другое то что для аб-пинак-фубинак, амидная связь (в центре) почти не затрагивается в организме.


alexlp
Цитата(Korvet @ 4.03.2014 - 06:25)
вот как угодно только не так. Амид может гидролизоваться до кислоты и амина, но никак не до кислоты и до спирта (в данном случае фенола). если вы считаете что фенол образуется из амина, который образовался при гидролизе, то тогда и сам амин тоже должен быть в БЖ, потому что достаточно полярное вещество и выводится вполне может сам. Это одно, ну а другое то что для аб-пинак-фубинак, амидная связь (в центре) почти не затрагивается в организме.

Спорить не буду. Подождем, что будет изыматься. И накормим им ваших червячков! biggrin.gif


Korvet
да-да эсперимент лучше всего!у нас пока ничего подобного не было. пока идет тока АМ-2201(N).


marko
Здравствуйте уважаемые коллеги!
Наконец-то просилировали нашу пробу с АМ 2201
Sample1- без дериватизации
Sample 2-метилирование+ силирование (метаболит на 32 минуте остался, а на 25 минуте интенсивность значительно уменьшилась)

Прикрепила второй файл


Korvet
чего-то я ничего не пойму. по моему ни в одной из проб нету того что было на 25.5мин в 1555met...


marko
Во второй пробе если посмотреть через экстракт ион можно увидеть маленький пик


Korvet
чето уж очень масенький. а в первой? непонятно куда же он девался...

то есть если бы это был спирт (СН2ОН), то он бы остался на первоначальном уровне в 1-ом образце, если бы это кислота, то этот пик бы отсутствовал в первом образце, но сохранился бы во втором.

а у нас полный 0 в первом и сомнительное наличие во втором. То есть с натяжкой, но вариант кислоты...Вы заново готовили пробу?


alexlp
Цитата(Korvet @ 4.03.2014 - 20:05)
чето уж очень масенький. а в первой? непонятно куда же он девался...

то есть если бы это был спирт (СН2ОН), то он бы остался на первоначальном уровне в 1-ом образце, если бы это кислота, то этот пик бы отсутствовал в первом образце, но сохранился бы во втором.

а у нас полный 0 в первом и сомнительное наличие во втором. То есть с натяжкой, но вариант кислоты...Вы заново готовили пробу?

Первая проба - без дериватизации.


marko
Да, проба приготовлена заново. Делала без гидролиза, с метилированием и метилирование+силирование. В метилированной пробе результат аналогичен 1555met, поэтому прикреплять не стала.
В постах выше говорилось что возможно первый метаболит не подвергся дериватизации, поэтому сделали закол пробы до дериватизации. Результат на приложенных хроматограммах


Korvet
Цитата(marko @ 4.03.2014 - 17:49)
В метилированной пробе результат аналогичен 1555met, поэтому прикреплять не стала.


вот это очень интересно. то есть силирование после метилирования как-то "убивает" вещество. странно это.


marko
Аналогичный результат был и в пробах с ТНJ, но не столь плачевный. Изначально более интенсивный пик первого метаболита после всех манипуляций значительно потерял в интенсивности по отношению к второму метаболиту. Не исключаю недочет в пробоподготовке


alexlp
Вот и у нас пока никак не идет силирование поверх метилирования. Исчезает все. Пока попытки прекратили - осталось 1 мл МСТФА sad.gif


Korvet
спешу похвастаться анонсом. выловили кролика у которого нашлись фторсодержащие метаболиты AM(N)-2201. моно-гидроксилированные в цепь. выложу завтра так так хроматограмма в формате масс-хантера. забыл конвертнуть для амдиса!


hot_assay
а какому способу пробоподготовки следует отдать предпочтение?


Korvet
спайсы я теперь делаю только так:
кислый гидролиз, эктракция гексан-этилацетат (7-1) из кислой среды и из рН8.
но по идее (теоретически) можно обойтись только кислой экстракцией (рН примерно 2).


alexlp
Цитата(Korvet @ 5.03.2014 - 21:50)
спайсы я теперь делаю только так:
кислый гидролиз, эктракция гексан-этилацетат (7-1) из кислой среды и из рН8.
но по идее (теоретически) можно обойтись только кислой экстракцией (рН примерно 2).


В принципе, действительно экстракция из кислой среды должна быть предпочтительнее в плане отделения от стероидов, прегнанов. Но не лишне в запасе иметь еще и экстракт из щелочной среды, и проверять его в случае неудачи с кислым...


chemist-sib
Цитата(Korvet @ 5.03.2014 - 20:34)
спешу похвастаться... выловили кролика у которого нашлись фторсодержащие метаболиты...

"Смехоточка": вспомнилось вашуковское: "Кролики - это не только 3-4 кг диетического мяса...". tongue.gif "Да здравствует отечественное "кролиководство" - источник наших новых знаний! Ура, товарищи!".
ЗЫ: не сочтите за флуд; так, для разрядки... smile.gif


Korvet
а я их смешиваю! (экстракты)


Korvet
обещанный файл. видны фторсодерж. метаболиты
http://yadi.sk/d/05DvEd1uK5Q5B


KSS17
Здравствуйте!
А чего с этим форматом делать?


Sergei4
Цитата(KSS17 @ 6.03.2014 - 21:18)
Здравствуйте!
А чего с этим форматом делать?

Здравствуйте, в AMDIS меню File - Open и выбираем нужный формат.
Судебная медицина


marko
Цитата(Korvet @ 5.03.2014 - 23:50)
спайсы я теперь делаю только так:
кислый гидролиз, эктракция гексан-этилацетат (7-1) из кислой среды и из рН8.
но по идее (теоретически) можно обойтись только кислой экстракцией (рН примерно 2).


Здравствуйте! Хотелось бы узнать какой объем пробы Вы вводите в хроматограф и какое напряжение на умножителе используете


Korvet
напряжение согласно atune, без усиления, объем 1 мкл, объем пробы порядка 300мкл, представленные хроматограммы получены без деления потока, но иногда делаем 1/10.
но кстати те хроматограммы что я выкладываю в формате *.xml, они сняты на гх-мс-мс, просто в режиме сканирования 1Q. поскольку прибор новый, да и чувсвт. у него говорят побольше чем на 5973.

хотя просматривал старые хроматограммы из архива (5973N) на предмет этого вещества (AM(N)-2201), тоже нашел 2 хроматограммы с ним. (условия те же)...


marko
Спасибо за ответ smile.gif


Korvet
еще серия метаболитов нафтоил индазольных спайсов

(N-деалкилированные, гидроксилированные либо в индазол, либо в нафтоил).


Нажмите для просмотра прикрепленного файла


alexlp
Цитата(marko @ 7.03.2014 - 11:03)
Здравствуйте! Хотелось бы узнать какой объем пробы Вы вводите в хроматограф и какое напряжение на умножителе используете


Объем пробы 1 мкл, растворитель - этилацетат, изооктан.
Ввод пробы - Pulsed splitless 36.259 psi - 0.5min, Purge flow 50ml/min at 1 min.
Напряжение на умножителе - Gain factor = 1.5


Korvet
Цитата(Korvet @ 8.03.2014 - 11:07)
еще серия метаболитов нафтоил индазольных спайсов

(N-деалкилированные, гидроксилированные либо в индазол, либо в нафтоил).



забыл указать что получены производные только в виде ТМС эфиров.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла


NVSh
Здравствуйте, подскажите, пожалуйста, при каких условиях нагрев термостата колонки происходил для хроматограмм, представленных в этой теме? Спасибо.


Korvet
у меня 105-20-290

со 105 скорость 20 до 290 градусов, выдержка при оной т-ре минут 25 где-то.

Вы бы так с условиями не заморачивались, это дело десятое, там же индексы удерживания для всех веществ даны. откалибруйте Вашу систему при ваших условиях и всего-то делов. только вот скорость нагрева выше 20гр/мин точно не надо поднимать, проблемы с разделением могут быть.


alexlp
Цитата(Korvet @ 11.03.2014 - 16:51)

Вы бы так с условиями не заморачивались, это дело десятое,


Начальные условия очень важны для реализации эффекта растворителя и эффекта холодного улавливания при вводе пробы без деления потока. От этого зависит ширина начальной зоны и, соответственно, эффективность разделения. А от этого зависит и чувствительность, и чистота спектров...


Korvet
Вы имеете в виду когда начальная т-ра меньше т-ры кипения растворителя на 10 градусов...тут надо иметь в виду одну штуку, растворитель может схлопнуться в мениск, и получим проброс зоны растворителя, тогда все пики буду рогатыми и двоиться,это особенно начинает проявляться когда колонка портится.
Да и как пишут эта штука срабатывает только для сильнолетучих соединений, их надо в начале намного тормозить, чтобы они после раскаленного испарителя далеко не улетели, для этого и используют пленку сконденсированного растворителя в начале колонки...если же наши вещества слаболетучи, то им это штука ничем не поможет, они тормознутся в начале колонке и при 200гр.

я пробовал и так и этак, собственно один прибор работает с более низкой т-ры, другой со 105, разницы нету никакой, RI воспроизводятся, время теряется больше конечно с более низкой т-ры.


NVSh
Большое спасибо! Будем работать.


Korvet
ну что обновим темку?
смотрим пик на 22.26 мин, по 316 иону, а попутно включаем 416. видно что пики расслаиваются.
то вещество что смотрим по 416 это метаболит АМ(N)-2201, а вот то вещество что имеет пик 316, мне кажется может быть дважды гидрокси метаболитом АМ(N)-2201. так как 416+88=504, как раз молекулярник этого спектра. Но как-то масс-спектр все же не вяжется с предполагаемой стр-рой...Нажмите для просмотра прикрепленного файла



alexlp
Цитата(Korvet @ 23.03.2014 - 22:02)
так как 416+88=504, как раз молекулярник этого спектра. Но как-то масс-спектр все же не вяжется с предполагаемой стр-рой...Нажмите для просмотра прикрепленного файла

Это? Нажмите для просмотра прикрепленного файла

Полагаю - это не то...


Korvet
да, да это самое. больно уж хорошо сходится 416+88=504

я тоже уже полагаю что это не оно. купился на "сходство молекулярника". да и не могут в одном месте выходить два метаболита...


KSS17
Здравствуйте!
Читаем статью в закрытом разделе... smile.gif


marko
Здравствуйте уважаемые коллеги!

Не могли бы Вы поделиться полной версией статьи "Two new synthetic cannabinoids, AM-2201 benzimidazole analog (FUBIMINA) and (4-methylpiperazin-1-yl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl)methanone (MEPIRAPIM)..... Forensic Toxicol. 26.11.2013."


alexlp
Цитата(marko @ 26.03.2014 - 17:59)
Здравствуйте уважаемые коллеги!

Не могли бы Вы поделиться полной версией статьи "Two new synthetic cannabinoids, AM-2201 benzimidazole analog (FUBIMINA) and (4-methylpiperazin-1-yl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl)methanone (MEPIRAPIM)..... Forensic Toxicol. 26.11.2013."

Она в закрытом разделе. Если у Вас нет доступа-вышлю через ЛС.


marko
Буду благодарна если вышлите в личку smile.gif


Tatarin_116
Цитата(marko @ 26.03.2014 - 16:34)
Буду благодарна если вышлите в личку smile.gif

интересующая статья здесь


Korvet
еще 1 метаболит: деалкил, дигидрокси (по всей видимости гидрокси идут в индазол)

второй спектрик в файле из статьи.


alexlp
Обещанные хроматограммы по последовательной дериватизации короткохвостого метаболита THJ2201 (THJ-2201-M1 (-C2H4F, COOH), methyl-):

537_ur_jwh_hyd_spe_nat.D - без дериватизации, натив;
537_ur_jwh_hyd_spe_me_K.D - метилирование с метилйодидом и карбонатом;
537_ur_jwh_hyd_ext_metms.D - силирование МСТФА метилированного экстракта.

Гидролиз кислотный, классика JWH.

Нажмите для просмотра прикрепленного файла


https://dl.dropboxusercontent.com/u/20989379/thj2201m1.zip


Korvet
да, у меня также получилось...


Korvet
ой, блин, щас такую интересную фигню заметил.
было 2 образца с большой концентрацией метаболитов как моногидрокси, так и С2-СООН, отбразцы от 30 го марта, решил провести мс-мс эксперименты с моногидроксисоединениями. Выделил вещества, и оказалось что практически все перешло в дезалкилмоногидрокси. спектры я здесь ранее выкладывал. оба образца стояли в холодильнике в жидком виде (на нижней полке).

То есть метаболизм прошел дальше уже вне организма!

мс-мс эксперимент в общем-то накрылся, но зато какая интересная фигня выяснилась!!!


hot_assay
Цитата(Korvet @ 1.04.2014 - 19:39)

было 2 образца с большой концентрацией метаболитов как моногидрокси, так и С2-СООН, отбразцы от 30 го марта, решил провести мс-мс эксперименты с моногидроксисоединениями. Выделил вещества, и оказалось что практически все перешло в дезалкилмоногидрокси. спектры я здесь ранее выкладывал. оба образца стояли в холодильнике в жидком виде (на нижней полке).

То есть метаболизм прошел дальше уже вне организма!

мс-мс эксперимент в общем-то накрылся, но зато какая интересная фигня выяснилась!!!

объект анализа - моча?
а C2-COOH-метаболит полностью исчез?


Korvet
да моча, полностью не исчез, но сильно убыл.Нажмите для просмотра прикрепленного файла


alexlp
Рискну предположить, что это не метаболизм, в смысле не ферментативный процесс.
Вы не встречали работы по деградации каннабимиметиков на растительных носителях?
Собственно для чего, или против чего, добавляют антиоксиданты (токоферолы)?

Но, с другой стороны, жесткий кислотный и щелочной гидролиз ведь не приводит к деалкилированию...


Korvet
если не ферментативный то какой? связь азот-углерод нас всех переживет, если ее кто-то не сгрызет конечно. да и оксигруппа в ароматику так просто едва влезет, во всяком случае не видел я такого с нативными объектами, даже из кольянов. а токоферол Вы думаете кто-то добавляет? мне кажется он сам по себе как компонент раст. матрицы идет. или Вы где-то видели на торчковских форумах про добавление токоферола?


alexlp
Цитата(Korvet @ 1.04.2014 - 22:35)
если не ферментативный то какой? связь азот-углерод нас всех переживет, если ее кто-то не сгрызет конечно. да и оксигруппа в ароматику так просто едва влезет, во всяком случае не видел я такого с нативными объектами, даже из кольянов. а токоферол Вы думаете кто-то добавляет? мне кажется он сам по себе как компонент раст. матрицы идет. или Вы где-то видели на торчковских форумах про добавление токоферола?

Мне кажется, что я что то уже слышал про такие процессы, но краем уха. Источник - кажется лекции по JWH на кафедре. Врать не хочу, если коллеги знают больше - они расскажут.


hot_assay
странная ситуация. Моча без примеси крови? В пластиковом контейнере?
у нас объекты стоят в очереди до 2-3-недели...
Но есть у меня объект, который пробоподготавливался сегодня в стандартизированных условиях, и в данный момент продолжает стоять в холодильнике (без заморозки). так что надо будет проанализировать спустя пару дней. Если процесс, который описывает уважаемый Korvet, будет воспроизводим, то это радикально меняет подход к выявлению метаболитов THJ-2201... Я (вслед за AMDIS'ом wink.gif ) всегда обращаю внимание прежде всего на C2-COOH-метаболит (его всегда больше всех остальных). А если при хранении он уходит........

Цитата(Korvet @ 1.04.2014 - 19:39)

было 2 образца с большой концентрацией метаболитов как моногидрокси, так и С2-СООН, отбразцы от 30 го марта, решил провести мс-мс эксперименты с моногидроксисоединениями. Выделил вещества, и оказалось что практически все перешло в дезалкилмоногидрокси. спектры я здесь ранее выкладывал. оба образца стояли в холодильнике в жидком виде (на нижней полке).

спектры моногидрокси- и дезалкилмоногидрокси-метаболитов есть текущей версии сводной библиотеки sudmed?


Korvet
по 2-3 недели без заморозки? и че не портится?

а Вы обращайте внимание также на дезалкил метаболиты, я их выкладывал на прошлой странице.


hot_assay
Цитата(Korvet @ 1.04.2014 - 20:54)
по 2-3 недели без заморозки? и че не портится?

а Вы обращайте внимание также на дезалкил метаболиты, я их выкладывал на прошлой странице.

бывает, грибы вырастают wink.gif
но всё из известных целевых вполне стабильно. В частности, 6МАМ не успевает гидролизоваться wink.gif


Korvet
вопрос -то сейчас для меня в другом. можно ли нативные так заквасить. будем пробовать!


alexlp
Цитата(hot_assay @ 1.04.2014 - 22:54)

спектры моногидрокси- и дезалкилмоногидрокси-метаболитов есть текущей версии сводной библиотеки sudmed?

Да, в сводной библиотеке большой набор деалкилированных метаболитов от Корвета. Кроме последнего. Предлагаю еще технологическую библиотечку, в которой искусственно сконструированные спектры (???) деалкилированных метаболитов (из АМ2201)


hot_assay
В статье В.А. Шевырина и соавт. читаем:
Цитата
"Масс-спектры ИЭ соединений I-III (рис. 3), аналогично МС/МС-спектрам, содержат
пики одинаковых по значениям m/z ионов. Особенно наглядно это проявляется для изомерных соединений I и III, спектры которых обладают достаточно высоким значением показателя сходства R.Match на уровне 800 единиц, что может привести к ошибке идентификации при использовании библиотечного поиска только в автоматическом режиме и некритичной оценки полученных результатов."

В связи с этим возникают вопросы:
- имеются ли у кого-то какие-либо данные о текущей выявляемости BIM-2201 (соединение III) в вещдоках?
- задавался ли кто-то вопросом об отличиях в EI-спектрах метаболитов THJ-2201 и BIM-2201?


KSS17
Здравствуйте!
Цитата(hot_assay @ 2.04.2014 - 10:43)

...В связи с этим возникают вопросы:
- имеются ли у кого-то какие-либо данные о текущей выявляемости BIM-2201 (соединение III) в вещдоках?
- задавался ли кто-то вопросом об отличиях в EI-спектрах метаболитов THJ-2201 и BIM-2201?


1. У нас пока её нет.
2. При сравнении спектров нативных соединений имеется характерный признак для BIM-2201, выброс СО. Есть вероятность, что этот же признак будет наблюдаться в метаболитах данного соединения.


marko
Здравствуйте! У нас тоже выявляют только АМ(N) 2201


hot_assay
Глубокоуважаемые коллеги!
Выкладываю хроматограмму мочи потребителя THJ-2201 и AB-PINACA.

http://rusfolder.com/40345606

Без гидролиза, экстракция при pH около 4, TMS-дериватизация.
Моё внимание привлёк пик на 20,21 мин c m/z 341, 359, 251.
Вроде бы в других объектах такого не видел.
При pH 7 не переходит.
После гидролиза возрастает более чем в 2 раза.
При повторном отборе пробы мочи у данного пациента (на следующий день) вещество практически отсутствовало.
Что бы это могло быть?
Кому-то встречалось нечто подобное?


доктор морфолог
Цитата(hot_assay @ 6.04.2014 - 14:50)
Глубокоуважаемые коллеги!
Выкладываю хроматограмму мочи потребителя THJ-2201 и AB-PINACA.

http://rusfolder.com/40345606

Без гидролиза, экстракция при pH около 4, TMS-дериватизация.
Моё внимание привлёк пик на 20,21 мин c m/z 341, 359, 251.
Вроде бы в других объектах такого не видел.
При pH 7 не переходит.
После гидролиза возрастает более чем в 2 раза.
При повторном отборе пробы мочи у данного пациента (на следующий день) вещество практически отсутствовало.
Что бы это могло быть?
Кому-то встречалось нечто подобное?

Добрый день! Пациент в стационаре? Следы на второй день были наверняка, а на 3-й день и ни следов не найдете.


Русская версия Invision Power Board © 2001-2019 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!