RT-PCR

здравствуйте! с момента внедрения в наш технологический процесс роботов автоматической дозировки и раскапывания миксов QIAgility появились проблемы с достоверностью данных полученных после RT-PCR. Полученные данные занижены. В некоторых случаях образцы с полученной концентрацией равной "0" дают при дальнейшем форезе читабельные фореграммы. Зачастую образцы со средней концентрацией, диапозоном от 0,5 до 5 нг/мкл после нормализации дают на фореграммах "зашкал". Решать этот вопрос мы приспособились, однако понять и устранить причину не получается. Кто может, отзовитесь, помогите, пожалуйста!!!

Судя по описанию проблемы, у Вас просто съехала калибровка и прибор занижает концентрацию ДНК. Читайте мануал как это исправить или просто введите поправку и не заморачивайтесь

ЗЫ: название темы все-таки лучше делать информативным...

спасибо за подсказку с названием темы. В следующий раз учту.
калибровал буквально месяц назад, т.к. подумал, что проблема именно в этом и просто пол года как не калибровался уже, но это не помогло. В мануале подобной информации нет. погрешность ввели (было мной указано что вопрос то технически решили). вопрос в причине этой проблемы остается открытым.

доброго вечера. вероятнее всего проблема в калибровке. попробуйте снова сами или пригласите специалиста.

Калибровался уже. И мылся.

Концентрацию ДНК стандарта проверьте (например обычным спектрофотометром). Не исключено, что она заниженная.

спасибо! помогли! Вы были правы!

... т.е. делая калибровку, Вы не проверили конц-ю стандартов?! Неужели это в инструкции не написано?

при проведении калибровки стандарты в принципе не нужны. мануал почему то не грузится хотя я его сжал. могу на почту кинуть, если интересно