Посоветуйте как изменить проводку тимуса



Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Судебно-медицинская гистология
ЕвгенийЙ
Здравствуйте. Обращаюсь к профессионалам, т.к. сам уже не знаю...
Начал заниматься, будучи в аспирантуре, тимусом, и столкнулся с ситуацией, что препараты после проводки получаются "пересушенными", неоднократно корректировал нахождение в спиртах, хлороформах и парафинах, но воз и ныне там...
Ситуация осложняется ещё и тем, что эксперимент ставлю на крысах, и ткань ведёт себя иначе чем человеческая.
Привожу несколько вариантов из тех, что пробовал
1) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 2 часа. Далее спирт/хлороформ 2:1, 1:1, 1: 2 -- по 45 мин. Затем хлороформ 1-й и 2-й -- по 30 мин. Потом хлороформ/парафин -- 1 час. Далее парфины 1-й,2-й,3-й -- по 30 минут.

2) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 1 часу. Далее спирт/хлороформ 2:1, 1:1, 1: 2 -- по 30 мин. Затем хлороформ 1-й и 2-й -- по 20 мин. Потом хлороформ/парафин -- 45 мин. Далее парфины 1-й,2-й,3-й -- по 30 минут.

3) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 1 часу. Далее спирт/хлороформ 2:1, 1:1, 1: 2 -- по 20 мин. Затем хлороформ 1-й и 2-й -- по 20 мин. Потом хлороформ/парафин -- 30 мин. Далее парфины 1-й,2-й,3-й -- по 20 минут.

4) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 1 часу. Далее спирт/хлороформ 1:1 -- 20 мин. Затем хлороформ -- 20 мин. Потом хлороформ/парафин -- 20 мин. Далее парфины 1-й,2-й -- по 20 минут.

В итоге препараты получались вначале вообще как "сухарики", трескались и "высыпались" со стекла. А в последнем варианте картина была менее выражена, но, тем не менее, весь препарат потрескавшийся и "порванный"...

Фиксация препаратов производилась в р-ре нейтрального 10% формалина.

Уже не знаю что делать. Ещё уменьшать время нахождения по реактивам?..
Посоветуйте пожалуйста.


ЕвгенийЙ
P.S.: заливка в блок производилась парафин:воск:каучук=20:5:1 смесью.


доктор морфолог
Цитата(ЕвгенийЙ @ 23.06.2016 - 13:49)

В итоге препараты получались вначале вообще как "сухарики", трескались и "высыпались" со стекла. А в последнем варианте картина была менее выражена, но, тем не менее, весь препарат потрескавшийся и "порванный"...

Одним словом, крошатся парафин?
Причина:
- слишком твердый
- медленно охлаждался при заливке
- низкая температура окружающей среды
- большой угол наклона ножа.
Устранение:
- подышать на парафиновый блок
- изменить наклон ножа
- перезалить обьект


ЕвгенийЙ
Я вероятно непонятно описал свою проблему.

Моя проблема в том, что не парафин крошится, он как раз достаточно пластичный из-за добавленного воска. Трескается сам препарат, при микроскопии видны разрывы в самой ткани. Есть подозрение, что я его в каком-то из реактивов передерживаю по времени. Но я не могу понять, то ли это спирты, то ли хлороформы, то ли в чём ещё проблема.

Я ещё грешил, что нож тупой. Пробовал одноразовыми лезвиями -- эффект тот же -- линейные разрывы ткани. Внешне выглядит как просто пересохла и потрескалась.


Надежда Ивановна
В спиртах пересушиваете. Завтра на работе посмотрю схему проводки.


доктор морфолог
Пересушили на спиртах, нужно пробовать резать поместив на него кусочек льда( довели до обезвоживания). На пока такая версия остается.


ЕвгенийЙ
Спасибо большое за помощь.


Надежда Ивановна
Цитата(ЕвгенийЙ @ 24.06.2016 - 12:37)
Спасибо большое за помощь.



Простите, обещание относительно протокола проводки не выполнила, в понедельник обязательно пришлю протокол проводки специально для органов иммунной системы крыс и мышей.


Медик
Цитата(Надежда Ивановна @ 24.06.2016 - 20:27)
в понедельник обязательно пришлю протокол проводки специально для органов иммунной системы крыс и мышей.

Схемы проводки органов иммун.системы курей у Вас случайно нет ?


доктор морфолог
Цитата(Медик @ 25.06.2016 - 02:04)
Схемы проводки органов иммун.системы курей у Вас случайно нет ?

smile.gif специально у нас нет пока м.б.ноухау у иных медицин?


Надежда Ивановна
Проводка для органов иммунной системы крыс и мышей. В нашей лаборатории данная проводка осуществляется в автомате карусельного типа, по сути, это автоматизированный тип ручной проводки.
С уважением Надежда Ивановна

Реактив Экспозиция Температура

70 % спирт 1 час комнатная
80% спирт 1 час комнатная
96 % спирт I 1 час комнатная
96 % спирт II 1 час комнатная
Абсолютный спирт I 1 час комнатная
Абсолютный спирт II 30 минут комнатная
Абсолютный спирт – хлороформ (1:1) 30 минут комнатная
Хлороформ I 1 час комнатная
Хлороформ II 1 час комнатная
Парафин I 1 час 58 ˚С
Парафин II 1 час 58 ˚С


ЕвгенийЙ
Спасибо большое за помощь, буду пробовать.


ЕвгенийЙ
Подскажите ещё пожалуйста: до проведения по батарее вы материал фиксировали в 10% формалине или в жидкости Буэна?

И может ли фиксация в формалине также быть причиной того, что тимус "пересушивается"?


Надежда Ивановна
Цитата(ЕвгенийЙ @ 5.07.2016 - 15:37)
материал фиксировали в 10% формалине или в жидкости Буэна? И может ли фиксация в формалине также быть причиной того, что тимус "пересушивается"?

Образцы тканей фиксируем в 10% нейтральной формалине, фиксация в формалине не является причиной пересушивания тканей.


Русская версия Invision Power Board © 2001-2017 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!