изолирование героина из биологического материала



Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Все остальное о судебной медицине > в помощь студенту
GorOx
Добрый день! Я студентка. Не могу понять из какого биологического материала и как изолировать героин. Задача: девушка умерла "на игле".


Медик
Тема перемещена в профильный раздел из КЦ.


chemist-sib
Основное, что здесь приходится учитывать, героин - весьма лабильный токсикант. Время его полувыведения исчисляется несколькими (не более 10) минутами. Поэтому при подобной быстрой смерти - "на игле" искать исходный героин разумно лишь "на входе" - в той же самой крови. Вполне логичным будет и традиционное исследование таких же традиционных биожидкостей - желчи и мочи - на "общий" морфин - после гидролиза (кислотного или ферментного). Наличие "общего" морфина в желчи (а за время наступления "быстрой смерти" он - хоть сколько-то - но успевает дойти до желчи) и отсутствие (или присутствие лишь в следах) его в моче подтвердят быстрый характер смерти. Ну, и планировании такого исследования надо бы не забыть про характерный промежуточный метаболит героина - 6-моноацетилморфин. А вот его время полувыведения из организма уже исчисляется часами, соотвентственно, и возможность его обнаружить, даже при отсутствии исходного диацетилморфина - выше.
Теперь - "как": наиболее просто - жидкость-жидкостной экстракцией. Сам героин и 6-МАМ - при рН среды, близких к нейтральной (чтобы не спровоцировать гидролиз сложноэфирной связи в процессе изолирования); морфин - после гидролиза матрицы - при рН 8,5-9; экстрагент - хлороформ с высшими спиртами. Либо - твердофазная экстракция (более чистые извлечения, выше выход, но - и больше затрат на оборудование). Обнаружение - ТСХ, ВЭЖХ-УФ, ГХ-МС, ВЭЖХ-МС-МС,..
Успехов! smile.gif


barmen
Цитата(GorOx @ 17.11.2016 - 07:38)
... Не могу понять из какого ... материала ... изолировать героин...


Лучше всего из опийного мака (Papaver somniferum) tongue.gif


GorOx
Посмотрите написала химическое исследование, правильно или что-то не так: К 30мл крови прибавила 5мл 10% раствора гидроксида натрия, 30мл 10% раствора вольфрамата натрия, взбалтывала 10 минут, добавила 50мл 1н раствора серной кислоты до рН 1-2 по универсальному индикатору и нагревала в кипящей водяной бане в течение 30 минут. После охлаждения смесь центрифугировала 15 минут со скоростью 6000 об/мин. Центрифугат экстрагировала хлороформом 3 раза по 10мл х 10 минут. Экстракты объединила, фильтровала через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия.
Реакция с реактивом Манделина. Несколько капель хлороформного извлечения внесла в углубление на фарфоровых пластинках и при комнатной температуре выпарила досуха. На сухие остатки нанесла каплю свежеприготовленный раствор 0,01 г ванадиевокислого аммония в 2 см концентрированной серной кислоты. Наблюдала фиолетовое окрашивание.
Реакция с реактивом Марки. Несколько капель хлороформного извлечения внесла в углубление на фарфоровых пластинках и при комнатной температуре выпарила досуха. На сухие остатки нанесла каплю раствор формальдегида в концентрированной серной кислоте. Наблюдала красное окрашивание, которое переходит в фиолетовое.
Реакция с реактивом Фреде. Несколько капель хлороформного извлечения внесла в углубление на фарфоровых пластинках и при комнатной температуре выпарила досуха. На сухие остатки нанесла каплю раствор молибдата аммония в концентрированной серной кислоте. Наблюдала фиолетовое окрашивание, которое переходит в грязно-зеленое, а потом в розовое.
Реакция образования этилацетата. К сухому остатку, полученному после выпаривания извлечения из биологического материала, прибавила 1 мл этилового спирта и 2 мл концентрированной сульфатной кислоты. На протяжении 3-5 мин. смесь нагревала на кипящем водном нагревателе. Ощущала запах этилацетата.
Метод хроматографии. На линию старта на хроматографической пластинке «Сорбфил» нанесла 1—2 капли хлороформной вытяжки. Правее на расстоянии 2—3 см на линию старта нанесла каплю раствора «свидетеля». Пятна на пластинке подсушила на воздухе. Затем пластинку внесла в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (этилацетат-метанол-25% раствор аммиака). Камеру плотно закрыла крышкой. После того как система растворителей поднимется на 10 см выше линии старта, пластинку вынула из камеры, подсушила на воздухе и опрыскала реактивом Драгендорфа, модифицированным по Мунье. Наблюдала появление коричневых пятен.


alexlp
Цитата(GorOx @ 29.11.2016 - 19:12)
Посмотрите написала химическое исследование, правильно или что-то не так: К 30мл крови прибавила 5мл 10% раствора гидроксида натрия, 30мл 10% раствора вольфрамата натрия, взбалтывала 10 минут, добавила 50мл 1н раствора серной кислоты до рН 1-2 по универсальному индикатору и нагревала в кипящей водяной бане в течение 30 минут.

Вот тут вы гидролизуете моноацетилморфин и диацетилморфин (если он там ещё есть) до морфина.
Цитата
После охлаждения смесь центрифугировала 15 минут со скоростью 6000 об/мин. Центрифугат экстрагировала хлороформом 3 раза по 10мл х 10 минут. Экстракты объединила, фильтровала через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия.
А тут Вы оставили весь морфин в водной фазе. Далее продолжать уже смысла нет.


chemist-sib
Прав коллега Alexlp - "каша"! В голове и на бумаге... wacko.gif
Итак, самое простой вариант: кровь разбавить водой (1:1) и при физиологическом значении рН (т.е. - как есть) пару раз экстрагировать смесью хлороформ-изопропанол (или н-бутанол) (9:1), извлечения объединить, посушить через безводный сульфат натрия и достаточную аликвоту (после упаривания) перенести на старт хроматографической пластинки (кстати, размеры стандартного листа "Сорбфила" - 10х10 см. От края до края! А старт начинается с того места, где наносятся пробы - на 1-1,5 см выше нижнего края! Поэтому пробег фронт растворителя (вместе с хроматографируемыми веществами) ну никак не может быть равным 10 см; в реале - 8-8,5-9 см), параллельно метчикам - растворам диацетилморфина и 6-моноацетилморфина. И цветные реакции - с реактивами Марки, Манделина и Фреде - лучше проводить именно после хроматографирования - "убьете двух зайцев" сразу: получите и чистую окраску конкретного пятна (без мешающего влияния неизбежных здесь соэкстрактивных веществ), и хроматографическую характеристику его - Rf. Не забывайте в описании ТСХ соотношение компонентов подвижной фазы; для упомянутой системы это, как правило - 85:10:5 (но в реальности дефицитный метанол, как правило, без проблем заменяется банальным 95-градусным этанолом).
Вот это будет исследование на нативные ацетильные производные морфина. И, отдельно, особенно при отрицательном результате такого исследования, желательно провести кислотный гидролиз и попытаться обнаружить морфин "общий". Такое исследование будет более чувствительным, но и более общим, "групповым", поскольку способно подтвердить присутствие как самого морфина, так и множества его производных.


alexlp
Цитата(barmen @ 17.11.2016 - 20:45)
Лучше всего из опийного мака (Papaver somniferum) tongue.gif

Судебная медицина


GorOx
Всем спасибо за помощь!


GorOx
А если так????
Химическое исследование. К 30мл крови прибавила 30мл воды при физиологическом значении рН = 7,4 экстрагировала 2 раза смесью хлороформ-изопропанол (9:1), извлечения объединила, фильтровала через безводный сульфат натрия. ****************************************
Реакция образования этилацетата. К сухому остатку, полученному после выпаривания извлечения из биологического материала, прибавила 1 мл этилового спирта и 2 мл концентрированной сульфатной кислоты. На протяжении 3-5 мин. смесь нагревала на кипящем водном нагревателе. Ощущала запах этилацетата. *****************************************
Метод хроматографии. На линию старта на 1-1,5 см выше нижнего края хроматографической пластинки «Сорбфил» нанесла 1—2 капли хлороформной вытяжки. Правее на расстоянии 2—3 см на линию старта нанесла каплю раствора «свидетеля» (растворам диацетилморфина). Пятна на пластинке подсушила на воздухе. Затем пластинку внесла в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (85:10:5). Камеру плотно закрыла крышкой. После того как система растворителей поднимется на 8 см выше линии старта, пластинку вынула из камеры, подсушила на воздухе и опрыскала раствором формальдегида в концентрированной серной кислоте. Наблюдала красно-фиолетовое окрашивание, Rf=6,3.


chemist-sib
Можно и так. Только - все равно - лучше стукнуть. Чтобы в окончательном варианте хода исследования реакция образования этилацетата не оставалась. Можете себе представить - сколько того ацетилированного морфина будет находиться в 30 мл крови? Ну, ширнул нарик 100-200 мг разбодяженного уличного героина (с концентрацией основного компонента 5-7%) в себя, "размазалось" все это в 5 литрах его крови (а потом - и достаточно быстро - во всех 40 литрах внеклеточной и внутриклеточной жидкости), депонировалась часть по потрохам. Сколько во взятой аликвоте будет? А сколько из них удастся изолировать?.. Ну, и учтите еще и выход реакции переэтерификации, чувствительность своего носа... И после всего этого - можете забыть про описанное надолго, если не навсегда.
А в остальном - можете поправить значение Rf: оно, чисто по определению, будет находиться в интервале от 0 до 1, но никак не больше. Поэтому, цифирке 0,63 - еще поверю.
Успехов! smile.gif


GorOx
А как обнаружить 6МАМ в извлечение из крови? Ведь он является маркером употребления героина


chemist-sib
Точно так же, параллельно самому героину: он будет изолироваться вместе с ним, в тех же самых "мягких" (рН от салокислой до слабощелочной среды) условиях в тот же полярный экстрагент. На ТСХ будет идти чуть немного пятна ДАМ и проявляться такими же цветами со всеми проявителями.
Ну, и помимо ТСХ - теперь уже "стандартные" для подобных исследований и лабораторий - ВЭЖХ- (-УФ, -МС), ГХ-МС...
Гораздо чаще 6-МАМ ищется и обнаруживается в моче - это уже на практике. Экстракция (без гидролиза) из слабощелочной среды (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия - рН 8,5, или тетрабората натрия - рН 9)...


Русская версия Invision Power Board © 2001-2017 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!