[MedGen]

Здравствуйте. Очень нужна помощь. Проблема в следующем: имеются гистологические срезы, заключенные между предметным и покровным стеклами. Нужно выделить из этих срезов ДНК с целью выявления точковых мутаций (ПЦР, секвенирование). Кто-нибудь сталкивался с такой задачей? Как можно сделать это с минимальными потерями биологического материала? можно ли как-то оптимизировать под это дело протокол фенол-хлороформной экстракции и как лучше всего отделить стекла друг от друга и сам срез от стекла?

Сообщение отредактировал MedGen - 30.07.2010 - 15:08

[savskaya2]

Здрасьте, здрасьте.
Сталкивались с этой задачей - исследования на корню задушили. Могу рассказать Вам про блоки - до стекол не дали мне дойти. Из блоков при обычной 48 - часовой формалиновой фиксации неплохо ДНК выделяется даже фенол-хлороформом и хорошие результаты дает ПЦР. Вопрос в том, сколько пролежало в формалине, в каком формалине и чем красили препараты на стеклах. В обычной гематоксилин-эозиновой окраске применяются сильные спирты и соляная кислота, так что многое зависит от того, какая окраска... Попробуйте найти блоки и взять кусочек в несколько кубических миллиметров. Стекла гистологические единственным способом друг от друга отделяют - погружают в раствор ксилола на неск. часов - и проверяют периодически растворился ли фиксатор (их несколько видов - природные и синтетический).

Сообщение отредактировал savskaya2 - 30.07.2010 - 21:29