[chemist-sib]

Продолжим обсуждение здесь, коллега luki - чтобы тематику разделов не путать, угу?

Выкладываю, давайте обсудим, самой очень интересно.

В акте № судебно – химического исследования внутренних органов от трупа Х., 1981 г.р. записано: «… ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ. 1А. 50г печени мелко измельчали, заливали 100 мл дистиллированной воды, подкисляли насыщенным раствором щавелевой кислоты до рН 2-3 (по универсальному индикатору) и настаивали в течение 2 часов при комнатной температуре при частом взбалтывании и проверке реакции среды. Затем смесь центрифугировали в течение 30 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливали, а объект дважды настаивали с равным количеством подкисленной дистиллированной воды по одному часу и повторно центрифугировали в тех же условиях. Центрифугаты объединяли и при рН-2 трижды экстрагировали по 5 минут /20,15,15мл/ хлороформом. Эмульсию разрушали центрифугированием, фильтровали через безводный сульфат натрия и выпаривали при комнатной температуре досуха. Остаток растворяли в 10мл хлороформа/извлечение 1/. Кислую водную вытяжку подщелачивали 25% раствором аммиака до рН 8-9 по универсальному индикатору и экстрагировали смесью хлороформ-н-бутанол (9:1) 2 раза по 20мл в течение 5 минут. Водный раствор подщелачивали 25% раствором аммиака до рН 10- 11 по универсальному индикатору и экстрагировали двумя порциями хлороформа по 15мл. по 5 минут, затем доводили рН до 13 по универсальному индикатору раствором едкого натрия и экстрагировали 10мл хлороформа в течение 10 минут. Хлороформно-бутанольные экстракты объединяли, эмульсию разрушали центрифугированием, фильтровали через безводный сульфат натрия и упаривали при комнатной температуре досуха. Остаток растворяли в 10мл хлороформа /извлечение 2/. 1. 2мл 1-го извлечения испаряли до небольшого объема и наносили на стартовую линию хроматографической пластинки «Сорбфил». Метчик: спиртовой раствор фенобарбитала. Хроматографировали в системе: хлороформ-н-бутанол-25%раствор аммиака(70:40:5). Длина пробега растворителей 8см. После высушивания пластинку проявляли последовательно 0,02% раствором дифенилкарбазона в хлороформе, а затем 2% раствором сульфата окисной ртути. — в исследуемой зоне фиолетовых пятен не наблюдали, в зоне с метчиком. Наблюдали фиолетовое пятно с Rf 0,46(фенобарбитал). 2мл 1-го извлечения испаряли до небольшого объема и наносили на хроматографическую пластинку «Сорбфил». Метчики: хлороформные растворы нитразепама, элениума. Система: хлороформ-ацетон (9:1). По высыхании пластинку сразу и через сутки рассматривали в лучах УФ-света, в исследуемой зоне светящихся или поглощающих УФ-лучи пятен не наблюдали. Пластинку проявляли реактивом Драгендорфа по Мунье, а затем 20% раствором серной кислоты. В исследуемой зоне пятен, окрашенных в оранжевый цвет, сходных по окрашиванию и величинам Rf с пятнами метчиков, не наблюдали. Пятна метчиков, окрашенные в оранжевый цвет, имели следующие величины Rf: элениум - 0,14; нитразепам - 0,29. 2мл 2-го извлечения испаряли до небольшого объема и наносили на хроматографическую пластинку "Сорбфил". Метчики: хлороформные растворы гидролизованного анальгина, аминазина, кофеина. Система: ацетон- хлороформ - диоксан- 25% раствор аммиака (5:45:47,5:2,5). Длина пробега растворителей 8см. После высушивания пластинку просматривали в УФ-свете - в исследуемой зоне и зоне с метчиком свечения не наблюдали. Затем пластинку проявляли: а). 10% раствором хлорного железа - в исследуемой зоне окрашенных пятен не наблюдали. В зоне с метчиками наблюдали фиолетовое пятно с Rf 0,58 (гидролизованный анальгин), пурпурно-красное пятно с Rf 0,79 (аминазин). б) 50% раствором серной кислоты с этанолом (1:1) - в исследуемой зоне окрашенных пятен не наблюдали, в зоне с метчиками окраска пятна аминазина усилилась; в) реактивом Драгендорфа по Мунье и 20% раствором серной кислоты - в исследуемой зоне окрашенных пятен не наблюдали. В зоне с метчиками наблюдали красно-коричневые пятна с Rf 0,58 ((гидролизованный анальгин), с Rf 0,79 (аминазин), серое пятно с Rf 0,56( кофеин). 4.2мл 2-го извлечения испаряли до небольшого объема и наносили на стартовую линию хроматографической пластинки "Сорбфил". Метчики: хлороформные растворы кодеина, аминазина и спиртовой раствор димедрола. Система:этилацетат-этанол-25 % раствор аммиака ( 17:2:1). Длина пробега растворителей 8см. После высушивания пластинку проявляли реактивом Марки (10 мл концентрированной серной кислоты, содержащие 0,5 мл раствора формальдегида). В исследуемой зоне окрашенных пятен не наблюдали. В зоне с метчиками наблюдали окрашенные пятна: фиолетовые с Rf 0,15 и с Rf 0,25 (кодеин), малиновое с Rf 0,6(аминазин), желто- коричневое с Rf 0,53 (димедрол). 5.2мл 2-го извлечения испаряли до небольшого объема и наносили на стартовую линию хроматографической пластинки "Сорбфил". Метчики: хлороформные растворы кодеина, аминазина, папаверина и спиртовой раствор димедрола. Система:этилацетат-этанол-25 % раствор аммиака ( 17:2:1). Длина пробега растворителей 8см. После высушивания пластинку проявляли реактивом Драгендорфа по Мунье и 20% раствором серной кислоты - в исследуемой зоне окрашенных пятен не наблюдали. В зоне с метчиками наблюдали оранжевые пятна: с Rf 0,17 и с Rf 0,42 (кодеин), с Rf 0,61 (аминазин), с Rf 0,54 (димедрол), cRf0,59 (папаверин). Б.50г почки исследовали как описано в п.1А. Результаты реакций аналогичны. 11А.50 г печени заливали двойным объемом 18% раствора соляной кислоты, помещали в колбу с обратным холодильником и нагревали в кипящей водяной бане в течение часа. Содержимое колбы охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через ватный тампон и из водной фазы (рН 2-3 по универсальному индикатору) проводили двухкратную экстракцию хлороформом порциями, равными 1\2 объема водной фазы. Солянокислый раствор подщелачивали 10% раствором гидроксида натрия до рН 7-8 по универсальному индикатору, а затем 25% раствором аммиака до рН 8-9 и экстрагировали смесью хлороформ-н-бутанол (9:1) дважды порциями, равными Уг объёма водной фазы. Затем доводили рН до 10-11 по универсальному индикатору и экстрагировали 2 раза хлороформом по 15мл по 5минут, затем доводили рНдо13 по универсальному индикатору раствором едкого натрия и экстрагировали 10мл хлороформа в течение 10 минут. Хлороформно-бутанольные экстракты объединяли, эмульсию разрушали центрифугированием, фильтровали через безводный сульфат натрия и испаряли при комнатной температуре досуха. Остаток растворяли в 10мл хлороформа. 2мл извлечения упаривали до 0,2мл и наносили на хроматографическую пластинку "Сорбфил". Метчики: хлороформные растворы гидролизованных элениума, феназепама, нитразепама. Система: бензол. Длина пробега растворителей 8см. После высушивания в зоне с исследуемым раствором желтых пятен не наблюдали, в зоне с метчиками наблюдали желтое пятно с Rf 0,35 (гидролизованный элениум). Через сутки пластинку просматривали в УФ-свете. В зоне с исследуемым раствором и метчиками свечения не наблюдали. Затем пластинку последовательно проявляли 2н раствором соляной кислоты, 0,5% раствором нитрита натрия и щелочным раствором бета-нафтола. В зоне с исследуемым раствором окрашенных пятен не наблюдали. В зоне с метчиками наблюдали красно-оранжевые пятна с Rf 0,33 (гидролизованный элениум) и с Rf 0,21 (гидролизованный нитразепам), розовое пятно с Rf 0,48 (гидролизованный феназепам). Далее извлечение исследовали реакциями № 3-5 как описано в п.1А с аналогичными результатами. Б. 50г почки исследовали как описано в п.11А с аналогичными результатами. В. 6мл желчи исследовали как описано в п. 11 А. Результаты реакций аналогичны. 111. К 30мл крови прибавляли 5мл 10% раствора гидроксида натрия, 30мл 10% раствора вольфрамата натрия, взбалтывали 10 минут, добавляли 50мл 1н раствора серной кислоты до рН 1-2 по универсальному индикатору и нагревали в кипящей водяной бане в течение 30 минут. После охлаждения смесь центрифугировали 15 минут со скоростью 6000 об/мин. Центрифугат экстрагировали хлороформом 3 раза по 10мл х 10 минут. Экстракты объединяли, фильтровали через безводный сульфат натрия, выпаривали досуха. Остаток растворяли в 10 мл хлороформа (извлечение 1). Кислый водный раствор подщелачивали 25% раствором аммиака до рН 8-9 по универсальному индикатору и 3 раза по 10мл х 10 минут экстрагировали смесью хлороформом-изопропанол (9:1). Затем подщелачивали 25% раствором аммиака до рН 10-11 по универсальному индикатору и экстрагировали 2 раза по 10мл х 10 минут хлороформом. Экстракты объединяли, фильтровали через безводный сульфат натрия и испаряли досуха. Остаток растворяли в 10мл хлороформа (извлечение 2). 1-ое и 2-ое извлечения исследовали как описано в п.1. Во всех реакциях окрашенных пятен не наблюдали.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. При судебно-химическом исследовании внутренних органов от трупа Х., 1981 г.р., установлено: 1) в печени, в почке не обнаружены: барбитал, фенобарбитал, барбамил, этаминал, бензонал, гексобарбитал, циклобарбитал, морфин, кодеин, героин, наркотин, папаверин, димедрол, аминазин, дипразин, тизерцин, трифтазин, мажептил, имизин и его аналоги; 2) в печени, в почке, в желчи не обнаружены: хлордиазепоксид (элениум), диазепам (седуксен), оксазепам, нитразепам, феназепам, нозепам; 3) в крови не обнаружены: барбитал, фенобарбитал, барбамил, этаминал, бензонал, гексобарбитал, циклобарбитал, морфин, кодеин, героин, наркотин, папаверин, димедрол, аминазин, дипразин, тизерцин, трифтазин, мажептил, имизин и его аналоги; 4) в желчи не обнаружены: морфин, кодеин, героин, наркотин, папаверин, димедрол, аминазин, дипразин, тизерцин, трифтазин, мажептил, имизин и его аналоги.

Кстати (не кстати), наркоман, который в коме был, умер в больнице, утром привезли. В понедельник буду исследовать. Ничего брать на общую химию не собираюсь, с 27.02. уже 10 дней прошло. Доктора вроде взяли кровь и мочу на наркотики (догадались). Буду ждать, что найдут там.
С ув., luki

С точки зрения химии - достаточно хорошо все сделано, с минимумом "ворчания" - при описанном режиме солянокислого гидролиза нитразепам, как правило, разваливается очень глубоко (осмоляется) - для него желателен более щадящий режим, а для феназепама, наоборот, требуется более жесткий гидролиз. Т.е., пойматься они могут, но для исключения их - желательно кое-что изменить (или просто обойти их молчанием) - но это ИМХО. И исключение димедрола в гидролизованной желчи... - я бы тоже не связывался с этим: димедрол при этом легко разваливается. Точно также я бы побоялся выносить необнаруженные опиаты в крови, не гидролизуя ее (хотя вопрос - в каком виде там опиаты "плавают" - еще ацетилированными, уже связанными в конъюгаты, или свободными - для меня остается открытым). И применительно к главному - опиатам в желчи (ибо именно в ней их концентрация - при острой и подострой смерти - максимальна) - я бы брал на исключение их аликвоты извлечений побольше, соответствующие 2 мл объекта (хотя была статья москвичей в СМЭ, где они говорили, что и 0,3 мл-овая аликвота - достаточна. По мне - очень смело...).
Теперь возможны еще следующие варианты объяснений: смерть очень быстрая - в течение 10-20 минут ("на игле"). Даже до желчи опиаты (если таки предполагать их прием) не успели дойти. В крови, как я писал выше, они исключены без предварительного гидролиза, т.е. недостаточно эффективным (для них) методом изолирования. Или - как вариант, также имеющий право на существование - в Ваших краях ширяются чем-то другим...
Подождем мнение других коллег-химиков? Мне самому оно очень интересно