[Aurinf]

Доброго Всем времени суток!!!!!!!!! Дорогие эксперты и патанатомы и все, все, все!!! Я к сожалению не медэксперт, но в интересующем меня вопросе вы доки как никто, посему рискну спросить, или даже скорее попрошайничать...
Я биолог, моя научная тема - транспланталогия, и сейчас мне приходиться делать много гистоисследований, в чем я полнейший дилетант Смотреть необходимо стенки аорты (в основном) и костные импланты после эксплантации. С подготовкой все в порядке, режу на криотоме, но вся заковырка вопроса в том, что совершенно не могу подобрать адекватный метод окрашивания, а уж проводку провести совершенно не получается - смываются со стекла (стекла HistoBond с полилизином), так что, неумеючи как Вы сами понимаете, далеко не уедешь!

Теперь вопрос: подскажите, пожалуйста, самый приемлемый способ окраски соеденительной ткани в моем случае, и самое главное, КАК можно провести окраску криосрезов?

Очень прошу не ругать меня по возможности, так как у живых людей я к сожалению не училась никогда, а в учебниках интресующих меня ответов просто нет!!!

P.S. Не подскажете ли еще случаем, где можно пройти экстренные ликбезовские курсы в Москве, хотя я конечно понимаю, что очередь из желающих не стоит, но может есть какие-то спецы, которые не прочь поделиться опытом и конечно не бесплатно.

С уважением и благодарностью заранее, Ирина.

[доцент украины]

Самый простой способ это обратитья на кафедру гистологии или патологической анатомии, в Москве их хватает, либо морфологическую лабораторию при мед вузе.

[Aurinf]

Самый простой способ это обратитья на кафедру гистологии или патологической анатомии, в Москве их хватает, либо морфологическую лабораторию при мед вузе.

Благодарю за внимание к моему вопросу.
Я уже думала об этом, тем более, что теоретическая возможность этого существует, но основная трудность в том, что преподавание гистологии основывается как правило на парафиновых блоках и классической микротомии, мне же необходимы криосрезы, а они катастрофически смываются даже при совсем бережной окраске...

Еще раз спасибо за ответ!!!!!!

[lana1973]

Работаю в патанатомии,и на криостате тоже. Стекла обычные,хорошо обезжиренные.Того фиксатора на стеклах,что у вас,у нас нет для потока цитобиопсий,поэтому срезы после срезания фиксируем в фиксаторе-точный состав напишу завтра,если заинтересует,потом красим гематоксилин-эозином или Ван -Гизоном так же,как и парафиновые срезы,только экспозиция в красителях гораздо меньше-от 10 сек до 1 минуты,дальше--как обычно--карбол-ксилол,ксилол и заключаем.Сам процесс"краски" занимает около 3-4 минут(без резки) А еще слетают толстые срезы!

[Aurinf]

Работаю в патанатомии,и на криостате тоже. Стекла обычные,хорошо обезжиренные.Того фиксатора на стеклах,что у вас,у нас нет для потока цитобиопсий,поэтому срезы после срезания фиксируем в фиксаторе-точный состав напишу завтра,если заинтересует,потом красим гематоксилин-эозином или Ван -Гизоном так же,как и парафиновые срезы,только экспозиция в красителях гораздо меньше-от 10 сек до 1 минуты,дальше--как обычно--карбол-ксилол,ксилол и заключаем.Сам процесс"краски" занимает около 3-4 минут(без резки) А еще слетают толстые срезы!

Огромное спасибо!!!!!!!! Меня очень ОЧЕНЬ интересует фиксатор и сразу преогромное СПАСИБО!!!!!!!! Буду очень Вам благодарна!!!!! Можно также у Вас поинтересоваться процессом прогонки в карбол-ксилоле, у нас обычно прогоняют в четырех концентрациях этанола, и Ваш метод мне очень интересен!!!!!!!!

[lana1973]

Начнем с начала:на крио материал у нас не фиксирован,это обычно операционный материал текущей операции(цито).Заморозка-петролейным эфиром.Про стекла я писала. После резки-фиксатор 1 минута,промыть водой(не дист!!!!)гематоксилин 1 минута,промыть водой от 30сек до минуты(до посинения ядер)эозин5-10 секунд,спирт-2 стаканчика с 96%,в каждом по 2-3 секунды(проще говоря,аккуратно поболтать )дать высохнуть и в карбол-ксилол для просветления ядер30 сек---2 мин,потом в карбол-отмываем ксилол(т.е. поболтать) Вот и все.Вода только водопроводная. Мы еще заключаем в полистерол,но это делают не все. Для науки заключают канадским бальзамом-у него лучше коэффициент преломления.
А теперь фиксатор:состав-10%формалин,96% спирт,уксусная к-та,хлороформ.
2 : 6 : 1 : 2 или в ml 40:120:20:40
форм:спирт:укс.кта:хлороформ

[Aurinf]

Начнем с начала:на крио материал у нас не фиксирован,это обычно операционный материал текущей операции(цито).Заморозка-петролейным эфиром.

Уважаемая Лана, доброе Вам время суток! Маленький вопрос - что значит "Заморозка-петролейным эфиром" - я пока про такое не слышала и очень хотелось бы узнать.

Благодарю Вас еще раз за помощь!

[lana1973]

В камере криостата стоит петролейный эфир,туда опускается кусочек ткани,когда он становится каменной плотности-пробуем иглой-мы его перекладываем и закрепляем на "столике"(закрепляем водой поверх замерзшего материала,буквально капля,все делаем в камере криостата)
А как замораживаете вы? Подчеркиваю еще раз-работаем с не фиксированным материалом.

[Aurinf]

Здравствуйте, Лана! Это очень интересно!!!! Мы замораживаем сразу в криотоме, а перед этим заливаем образцы заливочной средой GSV1 примерно на сутки. У нас криотом замораживает от 0 до -68С: по сути ПЭГ из среды выполняет функцию и фиксатора ткани и парафина (из него же и формируется пирамидка), а потом переносим на стекло и расправляем ("пальцем под срез - температурой тела") все там же - в камере криотома.
Если возможно, можно еще вопрос? Вы заключаете в полистирол или в бальзам??? Дело в том, что классический полистирол, даже сухой, я просто не могу найти, а подобрать не имея опыта готовую среду, например из ---Маунтов, достаточно трудно. Боюсь тупо выбросить деньги на ветер...

Еще раз - ОГРОМНОЕ ВАМ СПАСИБО!

[lana1973]

Да,действительно,все делается в камере криотома,кроме краски.Но-у нас выполнение цитобиопсий,больной в это время лежит на опер.столе и ни о какой суточной фиксации речь,конечно же,не идет.Часть материала на цито,а что осталось-обычная парафиновая поводка.А остальное так же.Заключаем полистеролом,т.к. бальзама на 45 тыс биопсий в год не напасешься,он только на "науку".Если надо,напишу,как готовить полистерол из сухого полистерола.

[Aurinf]

Да,действительно,все делается в камере криотома,кроме краски.Но-у нас выполнение цитобиопсий,больной в это время лежит на опер.столе и ни о какой суточной фиксации речь,конечно же,не идет.Часть материала на цито,а что осталось-обычная парафиновая поводка.А остальное так же.Заключаем полистеролом,т.к. бальзама на 45 тыс биопсий в год не напасешься,он только на "науку".Если надо,напишу,как готовить полистерол из сухого полистерола.

Здравствуйте, Лана!!!! не сразу ответила - немного заболела... Очень интересует приготовление полистерола - я тоже нашала два рецепта: по Саркисову и Лилли, но самое главное, вы случаем не знаете, где его купить, - смешно звучит конечно, но в фирмах, скоторыми мы сотрудничаем, сухого полистерола просто нет!!! Очевидно переходят на дорогие среды - им конечно выгоднее, а нам...

[lana1973]

Приготовить полистерол просто-мы делаем его так:в сухую емкость насыпают 1/2 емкости сухого полистерола,заливают ксилолом на 2/3 и в термостат при 36 градусах до полного растворения-это занимает около двух недель.Дальше-отливаем в 200 ml бутылку и добавляем 6 ml дибутилфтолата-он является пластификатором.Если полистерол густой-разбавляем его ксилолом до нужной консистенции.
Как ваши успехи?

[Aurinf]

Добрый день, Лана! Очередной раз спасибо! Успехи отлично! Успеваем, Вам благодаря!
Но вот полистирол найти не могу. Удивительно, но ни в одной прочитанной мною книге нет состава того полистирола, который мне нужен: ни процентного состава ингридиентов самого полистирола, ни на каких он растворителях, в конце концов с чем связаны его группы, а учитывая то, что разновидностей полистирола на рынке просто "до фига" - от вилок до шариков, я найти простой полистирол не могу Остается только Вам жаловаться....