[alexlp]

2. а что если перенести данную методу с печени на например мочу.

Полагаю, что в первую очередь напрашивается перевод и адаптация метода для слюны и различных смывов с поверхности тела. Для этих объектов , пожалуй, может быть достаточно лишь очистки ацетонитрильного экстракта на обращеннофазном сорбенте с последующей заменой растворителя... ИМХО

[Korvet]

я практиковал вот что:
при исследовании смывов с рук (очень жирные как правило объекты):
делал спиртовой смыв, упаривал его до минимального объема, разбавлял водой примерно 1\10, затем прибавлял немного ацетонитрила (1-2мл) и столько же гексана, высаливал хлоридом кальция. (потом мне сказали что брать сульфат магния). В результате после взбалтывания и отстаивания получалось три слоя (снизу вверх) вода-ацетонитрил-гексан. отбирал конечно средний. довольно чистенько получалось....


то есть штука в том что гексан не смешивается с ацетонитрилом (хотя какое-то взаимное растворение у них конечно есть), и вместо очистки ацетонитрила твердофазным сорбентом наверное можно использовать экстракцию из него гексаном липидов.

Сообщение отредактировал Korvet - 23.01.2014 - 18:11

[KSS17]

Здравствуйте!
Ну это новое, как говориться, хорошо забытое старое...
Остаток растворяют в метаноле или ацетонитриле (лучше 80%. 0,4-0,5 мл), затем экстрагируют гексаном (4-5 мл) в соотношении 1:10, нижний слой отбирают и исследуют.
Тут могут быть некоторые потери нативных каннабиноидов.
При исследовании смывов мы избегаем каких либо дополнительных процедур (очистка, дериватизация), дабы не исказить результатов.

Сообщение отредактировал KSS17 - 23.01.2014 - 20:10

[A58]

Ранее в теме про семинары, кажется, выкладывалось сообщение челябинского СМЭ о пробоподготовке методом QUECHERS, имею два вопроса:
1 опробовал ли кто-то еще что-то подобное.
2. а что если перенести данную методу с печени на например мочу. много ли не нужного балласта можно наблюдать в ацетонитрильном экстракте. я сегодня сделал эксперимент на воде правда. в качестве подопытных морфин, АМ-2201, индометацин (по 1 мкг\мл воды). к сожалению забыл внести стандарт, поэтому степень экстракции оценить не могу, но видно прекрасно все компонентны. экстрагировал вообще из нейтральной среды...

Здравствуйте коллеги! Методика Челябинского бюро СМЭ разрабатывалась исключительно для "потрохов". Чтобы применять QUECHERS для других объектов (с иным содержанием воды) необходимо менять состав смесей для экстракции и очистки. А после подбора состава снова тестировать. Готовые наборы TOX неплохо работают для большинства наркотиков, хуже извлекаются сильно гидрофильные основания (типа изониазида) и гидрофобные кислоты (типа вальпроевой), так как смесь для очистки предназначена, в основном, для очистки от жирные кислот и липидов. Мне кажется для синтетики типа PB (имеющей в основном кислые метаболиты) готовый состав не подойдет, так как степени извлечения метаболитов будут низкими, а вот для JWH, вполне пригодны.

[Korvet]

просто ради уточнения. А "готовые наборы ТОХ" это так называемые TOXITUBE А и Б? или это подготовленные QUECHERS для этих целей? или имеется в виду что-то иное?
если это то что описано у челябинских коллег. то наверное и выход многих жвх будет невысокий, ибо болольно уж гидрофобны (судя по времени выхода на вэжх)...

[A58]

просто ради уточнения. А "готовые наборы ТОХ" это так называемые TOXITUBE А и Б? или это подготовленные QUECHERS для этих целей? или имеется в виду что-то иное?
если это то что описано у челябинских коллег. то наверное и выход многих жвх будет невысокий, ибо болольно уж гидрофобны (судя по времени выхода на вэжх)...

Наборы называются VetexQ Tox
http://quechers.ru/library/vetex-tox_v2.pdf
Выход высоколипофильных веществ (клозапин, верапамил, нативного JWH-018) более 60%. Однако кислые метаболиты будут извлекаться хуже. Наборы разработаны только для тканей, для биожидкостей не испытывались, так как для мочи есть более простые и испытанные методики, включающие Enz HY & SPE.

Сообщение отредактировал KSS17 - 24.01.2014 - 19:15

[Korvet]

большое спасибо, много полезной информации

[Korvet]

я что-то как-то сообразить не могу какая же рН экстракции все таки в предлагаемом методе VetexQ Tox.

то есть там смесь Na3Cit и Na2HCit, по идее как раз где-то около 8 наверное, тогда зачем предлагается добавлять соляную кислоту? Но Вы пишите что кислые метаболиты извлекаются хуже, значит рН водной среды все равно. где-то больше 7...или по какой причине проблема с кислыми метаболитами?

[alexlp]

Наводит на мысль, что замыкание кольца происходит в сильнокислой среде (см. амфетаминовую методу в архиве)

[A58]

я что-то как-то сообразить не могу какая же рН экстракции все таки в предлагаемом методе VetexQ Tox.

то есть там смесь Na3Cit и Na2HCit, по идее как раз где-то около 8 наверное, тогда зачем предлагается добавлять соляную кислоту? Но Вы пишите что кислые метаболиты извлекаются хуже, значит рН водной среды все равно. где-то больше 7...или по какой причине проблема с кислыми метаболитами?

Коррекция рН при экстракции идет только добавкой солянки. Начинали оптимизацию действительно с цитратного буфера, но очистка экстрактов с солянкой идет гораздо лучше. Метаболиты и др. аналиты с карбокси- группой извлекаются хуже, так как составы экстракции и очистки подобраны для максимального удаления из экстрактов жирных кислот. Последние извлекаются из органов (особенно загнивших) в огромном количестве и сильно мешают анализу.
Для анализа биожидкостей по Quechers нужен совсем другой состав наборов и условия подготовки. Методик, использующих этот метод для анализа продуктов питания очень много, так что простор для творчества есть.
Вот сама методика:  _________Quechers.pdf ( 132.23 килобайт ) Кол-во скачиваний:  1075

[Korvet]

A58, но в "набор солей для экстракции" , то есть то что Вы первое добавляете входит цитратный буфер, хлористый натрий и сульфат магния. поскольку потом еще добавляется солянка, то я и спрашиваю какая же рН в оконцовке. То есть мне просто хочется понять принцип эктракции.
То есть например если экстрагент хлороформ, то мы делаем среду щелочную, в хлороформ идут основания. Если вещества кислые надо добавить кислоты, в хлороформ (например) пойдут кислые вещества.
Здесь как-то наоборот получается, подкисляем (хотя какая рН за счет цитратов все же вопрос), и получается что с кислотными метаболитами проблема. Очистка от ЖК и прочих липидов в методике идет за счет того что они остаются на С18, а к ацетонитрилу у них низкое сродство. рН тут особой роли не играет, разве только для ЖК.

методик тьма, Вы правы, вот как раз вчера читал для соков, но там тоже самое все. Количество воды примерно одинаковое везде, как известно органы человека на 80% из нее состоят, так что печень, что моча, я не думаю что разница будет большая, разе только С18 можно не добавлять...

вот общий подход изложен на постере
http://www.chem.agilent.com/Library/poster..._concept1_1.pdf

alexlp, я не вижу на Вашей TMS хроматограмме то что я вижу на своих где есть метаболиты этого вещества. Но в своих я уверен, я проверял фрагментацию ионов на мс-мс. Но возможно здесь просто другая стадия метаболизма...хотя у меня было 2 образца - 20часов после приема и 6 часов...

[A58]

A58, но в "набор солей для экстракции" , то есть то что Вы первое добавляете входит цитратный буфер, хлористый натрий и сульфат магния. поскольку потом еще добавляется солянка, то я и спрашиваю какая же рН в оконцовке. То есть мне просто хочется понять принцип эктракции.
То есть например если экстрагент хлороформ, то мы делаем среду щелочную, в хлороформ идут основания. Если вещества кислые надо добавить кислоты, в хлороформ (например) пойдут кислые вещества.
Здесь как-то наоборот получается, подкисляем (хотя какая рН за счет цитратов все же вопрос), и получается что с кислотными метаболитами проблема. Очистка от ЖК и прочих липидов в методике идет за счет того что они остаются на С18, а к ацетонитрилу у них низкое сродство. рН тут особой роли не играет, разве только для ЖК.

методик тьма, Вы правы, вот как раз вчера читал для соков, но там тоже самое все. Количество воды примерно одинаковое везде, как известно органы человека на 80% из нее состоят, так что печень, что моча, я не думаю что разница будет большая, разе только С18 можно не добавлять...

вот общий подход изложен на постере
http://www.chem.agilent.com/Library/poster..._concept1_1.pdf

В набор солей для экстракции VetexQ Tox цитраты не входят, только NaCl и сульфат магния. А в набор для очистки входит еще один компонент, который совместно с солянкой из экстракта способствует осаждению ЖК. Их совместное присутсвие значительно (статистически значимо) повышает соотношение сигнал-шум практически для всех аналитов.

Сообщение отредактировал A58 - 25.01.2014 - 10:12

[Korvet]

это странно, у наших в судебке такой же наборчик как на рисунке из Вашей ссылке, там на пакетике написано что цитраты входят в состав. вероятно есть разные версии этого набора?

"еще один компонент из набора для очистки" вероятно так называемый "PSA" именно его для удаления кислот в этих методах используют, тогда понятно почему кислотные метаболиты дискриминируются...

[Korvet]

ацетонитрил для мочей не подходит, он всю мочевину забирает, и вообще много полярщины. хроматограммы более шумные получаются...

[Elena_Kr]

Добрый день!

Не хочется ошибиться при выборе SPE картриджей! Подскажите, пожалуйста, картриджи со смешанной фазой маркируются HLB у любого производителя, или у каждой фирмы свои обозначения?