[A58]

Хроматограмму фторного АКБ-48 после силилирования прилагаю...[/quote]
Слушать надо классиков, "Товарищ Сухов" же Вам говорил "вряд-ли".

[Korvet]

Хроматограмму фторного АКБ-48 после силилирования прилагаю...
Слушать надо классиков, "Товарищ Сухов" же Вам говорил "вряд-ли".

дык вроде как получилось, хотя интерес (IMHO) это имеет чисто академический...

[alexlp]

дык вроде как получилось, хотя интерес (IMHO) это имеет чисто академический...

К сожалению посмотреть хр-му смогу только завтра...

Итак, есть экспертиза по акту СХИ, по которому нет мочи (списана), остались только хроматограммы силированных извлечений.
Ссылаться на товарища Сухова и его авторитетное мнение в выводах как-то...
Давать заключение о необнаружении только нативного АКБ48 в силированном извлечении не имея возможности предварительного исследования силированного АКБ как-то не корректно...
И в дальнейшем, не имея такой информации, гнать все пробы в силированном и нативном виде через масс - не экономно, трудоемко и неправильно.
Таким образом, интерес не только академический, но и исключительно практический при исследовании мочей а не чистых субстанций в рамках скрининга.

БОЛЬШОЕ СПАСИБО ЗА ХРОМАТОГРАММУ!

[RedPepper]

дык вроде как получилось...

Получилось-получилось...

К сожалению посмотреть хр-му смогу только завтра...

Можно и так:

[alexlp]

Получилось-получилось...

Можно и так:

Еще раз БОЛЬШОЕ СПАСИБО!

А самого АКБ48, не фторированного, у Вас нет?

Сообщение отредактировал alexlp - 22.04.2013 - 21:16

[RedPepper]

Слушать надо классиков, "Товарищ Сухов" же Вам говорил "вряд-ли".

Скорее всего, в случае амидов (в целом) и AKB-шек (в частности) главную роль играет время протекания реакции...

В моём случае ацетонитрильный раствор AKB-48F с добавкой BSTFA (1 мл ацетонитрила, 2 мг вещества, 50 мкл BSTFA) простоял ЧЕТВЕРО суток.
Честности ради, отмечу, что сразу после приготовления закрытую виалу с реакционной смесью около получаса грел на водяной бане, потом прописал на массе - пик ТМС-производного отсутствовал, через часа два повторил закол - результат тот же (нулевой)...

После этого решил подождать до следующего дня и... забыл до сегодняшнего - что из этого получилось, см. на приведенной выше хроматограмме...

P.S.: не исключаю вероятности не совсем корректного проведения силилирования (в первую очередь, в плане выбора растворителя и реагента) - обычно этим методом дериватизации не пользуюсь, так как работаю с нативными формами и ацилирования (иногда метилирования) мне хватает - если можно было сделать как-то по-другому (то бишь, лучше) - напишите... самому интересно...

А самого АКБ48, не фторированного, у Вас нет?

К сожалению, нет...

[alexlp]

P.S.: не исключаю вероятности не совсем корректного проведения силилирования (в первую очередь, в плане выбора растворителя и реагента)...

Ну тут возможны варианты...
Мы силилируем следующим образом:
Сухой остаток растворяем в 50 мкл БСТФА и нагреваем при 80 гр. 10 минут. Затем добавляем 150 мкл безводного этилацетата - и в масс.
Значительно лучше - использовать МСТФА, при этом экспозицию можно сократить вдвое.

Сообщение отредактировал KSS17 - 23.04.2013 - 08:15

[RedPepper]

МСТФА, насколько помню, у меня нету... А касательно БСТФА и используемой Вами методики - задачу понял... Постараюсь завтра выкроить время и попробовать такой вариант...

[Deminolog]

Насчет дериватизации у меня в голове крутится один отрывок из учебника по ГХ. Уже не вспомню, какого, правда Но постараюсь воспроизвести:
Для получения ТМС-производных необходимым условием является наличие подвижного протона. Наиболее распространено получение ТМС-производных соединений, содержащих -ОН группы.
ТМС производные образуются для большого числа функциональных групп, не только содержащих соединений, содержащих гидроксильные группы, но и для веществ, имеющих в своем составе —SH, —СООН, —NH2, =NH, и др. группы в соответствии с реакцией:
R—Н —> R—ТМС
На практике дериватизацию проводят следующим образом: к небольшому объему пробы или сухому остатку добавляют дериватизирующий агент, термостатируют при повышенной температуре (ну тут уже все ясно, для чего), после чего разбавляют полученный раствор. Получение ТМС-производных всегда проводится в апротонном растворителе. Наиболее распространенными агентами для получения ТМС-производных на сегодняшний день являются МСТФА и БСТФА. Активность БСТФА, соответственно, в 2 раза выше, таким образом его нужно существенно меньше для дериватизации...
Вот как-то так, простите, если есть неточности - поправьте, пожалуйста
По своему опыту дериватизации: ну вы, блин, даете! Адский избыток БСТФА! У него ж активность адкская... Я 1 мл экстракта растительного сырья дериватизировал 20 мкл БСТФА и это уже был приличный избыток (там куча фенольных соединений и алкалоидов было).
Но вот с дериватизацией подобного рода сталкиваюсь впервые.Да, дериватизация может идти тяжело, но вот смысл дериватизировать АКВ48? Без фтора - так же реакция пройдет, по идее. Фтор не создает никаких затруднений. Стерических в том числе. Вероятно одним из лимитирующих факторов может являться строение самого АКВ48. Как мне кажется, наличие Ad вовсе не является стерически благоприятным для протекания реакции фактором. Тем более для того, чтобы навесить такую здоровенную ТМС-группу... Вот и идет реакция в час по чайной ложке... Энергетически-то не очень выгодно, наверное. Выход, по идее, должен быть совсем маленьким. Могу у наших органиков спросить что да как, если будет интересно Ибо все вышесказанное - всего лишь мое мнение, которое может быть очень далеко от истины Вообще, если бы задумался о получении дериватов по -NH группе, то делал бы с основаниями Шиффа, наверное. Циклогесанон, нагревание, дегидротация...

Сообщение отредактировал Deminolog - 22.04.2013 - 23:26

[Korvet]

Соглашусь с Deminolog, смысла получать производные самого AKB-48 нету никакого, если вещество есть в моче в нативном виде, оно получится на гх и без дериватов, если проводить силирование в адекватных условиях (без фанатизма) когда закрываются ОН группы, производные амида получаться не будут, что и видно из опыта. (Alex спрашивает есть ли нативный AKB-48, да его на хр-ме процентов 90 нативного осталось!)

Впрочем все дело вкуса!

Сообщение отредактировал Korvet - 23.04.2013 - 03:26

[RedPepper]

...касательно БСТФА и используемой Вами методики - задачу понял... Постараюсь завтра выкроить время и попробовать такой вариант...

Попробовал... Причём, два раза - с экспозицией 10 и 60 минут (хроматограммы в прикреплённом архиве) - результат один и тот же - силилирование протекает крайне медленно!
Поэтому соглашусь с коллегами, что при анализе ваших объектов на предмет выявления в составе AKB-шек, действительно, нужно ориентироваться на нативную форму...

[Deminolog]

... которой может и не быть, увы! У уважаемых коллег Григорьева, Мельник, Савчука, а также товарищей из Антидопинга показано, что стоит ориентироваться все-таки на гидроксилированные формы, ежели нужна метаболомика. Надежнее оно как-то (ну или я неправильно понял, что тоже вариант ). Что если попробовать поискать именно гидроксилированный вариант? Вот тут, кстати, дериват легко будет образовываться. Там же гидроксилирование проходит по нескольким возможным вариантом, если мне память не изменяет: в алифатическую цепочку, в Ad, либо где-то в индольную часть?
P.S. А ведь такое поле для работы-то!

Сообщение отредактировал Deminolog - 23.04.2013 - 14:56

[Korvet]

Поле для работы большое и интересное.
Вот порассуждал сегодня. очень интересно мнение более опытных товарищей.

Нативная форма может встречаться в моче в том случае когда вещество достаточно полярно (не липофльно), в таком случае чтобы организм его мог вывести гидроксилирование не нужно особо, оно и так выходит, пример тот же PVP, ни тебе гидроксилирования ни тебе конъюгирования, что зашло то и вышло, хотя конечно понимаю что гидроксилирование идет и в этом случае, но какое нам до него дело, если полно нативной формы.

Другое дело с неполярными, липофильными веществами, они бы и рады выйти наружу, но не могут, и для этого им нужно стать более полярными, поэтому выводится медленнее, более растянуто, более низкие концентрации и только в форме метаболитов (потому что иначе не может). примеры - ТГК, жвх-018 и пр.

Однако каннабиметики последних образцов - амиды и эфиры, а значит более полярные вещества, и шанс увидеть их в моче в нативном виде больше, и плюс еще возможность гидролиза в организме до составляющих, как в случае карбоксилатов. мне кажется для продуктов гидролиза может быть даже и нету ОН-метаболитов, они уже значительно более полярны и выводятся сами собой, только в форме конъюгатов, но это уже мелочи!

Конечно было бы очень интересно глянуть на силированные хроматограммы образцов где есть 8-оксихинолин и кислота со сложным названием в ТМС-форме, может удалось бы увидеть что-то напоминающее ОН- производные как нативных веществ, так и продуктов гидролиза...

[A58]

... которой может и не быть, увы! У уважаемых коллег Григорьева, Мельник, Савчука, а также товарищей из Антидопинга показано, что стоит ориентироваться все-таки на гидроксилированные формы, ежели нужна метаболомика. Надежнее оно как-то (ну или я неправильно понял, что тоже вариант ). Что если попробовать поискать именно гидроксилированный вариант? Вот тут, кстати, дериват легко будет образовываться. Там же гидроксилирование проходит по нескольким возможным вариантом, если мне память не изменяет: в алифатическую цепочку, в Ad, либо где-то в индольную часть?
P.S. А ведь такое поле для работы-то!

Здравствуйте Коллеги! Ну вот, после попытки прошибить стенку лбом народ начал думать, а нельзя-ли решть проблему, чтобы было не так больно. Полностью поддерживаю последние умозаключения коллеги Deminolog, искать следует гидроксилированные формы, (в виде ТМС эфиров) а также возможные продукты гидролиза (метаболического) амидной связи, опыт показавает, что продуктов гидролиза немного, но они есть, и стоит попытаться из обнаружить, так как большинство подобных соединений имеют молекулярный ион значительной интенсивности, просчитать что искать пробем не составляет.

[RedPepper]

Однако каннабиметики последних образцов - амиды и эфиры, а значит более полярные вещества, и шанс увидеть их в моче в нативном виде больше...

Не забывай, что их курят, а в процессе курения идёт термолиз - особенно это характерно для карбоксилатов, которые и до организма по большей части не "долетают" в этой самой нативной форме, а что тогда говорить про биосреды...