[ramail]

Уважаемые коллеги,
Недавно задался вопросом: имея под рукой широко известные наборы для амплификации Identifiler, PowerPlex и т.д. можно ли усовершенствовать программу амплификации или изменить сочетание компонентов, чтобы получить более чувствительную систему (например снизить планку для Identifiler с 0.05 нг до 0.01 нг.)
Недавно моему вниманию преставилась методика с двойной амплификацией (т.е. амплифицировал, вытащил, добавил еще праймеров и полимеразы, и снова на амплификацию). Автор утверждает, что чувствительность повысилась до 0.01 нг. Это конечно вариант. Однако, двойной расход материалов.
Можно ли без дополнительных расходов. К примеру добавить новый цикл.
Никто не пробовал?

[Зубр]

Уважаемый 'ramail'!

...Можно ли без дополнительных расходов. К примеру добавить новый цикл.

Внимательно почитайте инструкцию к набору Identifiler. Увеличение количества циклов - это один из рекомендуемых (правда с осторожностью) путей достижения большей чувствительности, большего выхода, если хотите.
Всем привет.

[ramail]

А Вы пробовали увеличивать количество циклов? Я не заметил разницы.
Под добавлением новых циклов я подразумеваю прециклы. Есть ли у вас такой опыт?

[Зубр]

А Вы пробовали увеличивать количество циклов? Я не заметил разницы.
Под добавлением новых циклов я подразумеваю прециклы. Есть ли у вас такой опыт?

Уважаемый 'ramail'!
Увеличение циклов приводит к наработке амплификатов, но следует быть крайне осторожным с применением этого шага. Низкая исходно концентрация ДНК может сыграть злую шутку при попытке достичь генотипирования таким путём. Тут и "выпадение" аллелей и другие ошибки. Есть масса работ по валидации (validation) набора. Посмотрите довольно подробную статью.
 CroatMedJ_50_0250.rar ( 546.3 килобайт ) Кол-во скачиваний:  498

Успехов.

Сообщение отредактировал Зубр - 17.02.2010 - 20:44

[ramail]

Спасибо за ссылку.