Здравствуйте, гость ( Вход | Регистрация )
Повышение производительности ПЦР, Как можно вытащить генетический профиль ДНК с очень низкой концентраци |
ramail |
15.02.2010 - 23:50
Сообщение
#1 |
Новичок Группа: Участники Регистрация: 31.10.2008 Пользователь №: 10 642 |
Уважаемые коллеги,
Недавно задался вопросом: имея под рукой широко известные наборы для амплификации Identifiler, PowerPlex и т.д. можно ли усовершенствовать программу амплификации или изменить сочетание компонентов, чтобы получить более чувствительную систему (например снизить планку для Identifiler с 0.05 нг до 0.01 нг.) Недавно моему вниманию преставилась методика с двойной амплификацией (т.е. амплифицировал, вытащил, добавил еще праймеров и полимеразы, и снова на амплификацию). Автор утверждает, что чувствительность повысилась до 0.01 нг. Это конечно вариант. Однако, двойной расход материалов. Можно ли без дополнительных расходов. К примеру добавить новый цикл. Никто не пробовал? |
Зубр |
16.02.2010 - 00:08
Сообщение
#2 |
Магистр форума Группа: Модераторы Регистрация: 9.04.2007 Пользователь №: 4 766 |
Уважаемый 'ramail'!
...Можно ли без дополнительных расходов. К примеру добавить новый цикл. Внимательно почитайте инструкцию к набору Identifiler. Увеличение количества циклов - это один из рекомендуемых (правда с осторожностью) путей достижения большей чувствительности, большего выхода, если хотите. Всем привет. |
ramail |
16.02.2010 - 20:50
Сообщение
#3 |
Новичок Группа: Участники Регистрация: 31.10.2008 Пользователь №: 10 642 |
А Вы пробовали увеличивать количество циклов? Я не заметил разницы.
Под добавлением новых циклов я подразумеваю прециклы. Есть ли у вас такой опыт? |
Зубр |
16.02.2010 - 23:34
Сообщение
#4 |
Магистр форума Группа: Модераторы Регистрация: 9.04.2007 Пользователь №: 4 766 |
А Вы пробовали увеличивать количество циклов? Я не заметил разницы. Под добавлением новых циклов я подразумеваю прециклы. Есть ли у вас такой опыт? Уважаемый 'ramail'! Увеличение циклов приводит к наработке амплификатов, но следует быть крайне осторожным с применением этого шага. Низкая исходно концентрация ДНК может сыграть злую шутку при попытке достичь генотипирования таким путём. Тут и "выпадение" аллелей и другие ошибки. Есть масса работ по валидации (validation) набора. Посмотрите довольно подробную статью. CroatMedJ_50_0250.rar ( 546.3 килобайт ) Кол-во скачиваний: 473 Успехов. |
ramail |
17.02.2010 - 18:23
Сообщение
#5 |
Новичок Группа: Участники Регистрация: 31.10.2008 Пользователь №: 10 642 |
Спасибо за ссылку.
|
Сейчас: 2.05.2024 - 05:36 |