Цитата(Gordiz @ 17.08.2011 - 07:37)

Уверенность основана на опыте прогрессивной части человечества smile.gif В случае колличественной ПЦР как правило параллельно с образцами ставятся колличественные стандарты. При этом точность колличественной оценки не зависит от эффективности ПЦР при условии, что в стандартах и образцах эффективность ПЦР одинаковая. Эффективность важна скорее для чувствительности системы. При эффективности 60% может просто не хватить циклов, чтобы что-то увидеть.
Прогрессивное человечество только-только дозрело до выработки хоть каких-то лабораторных стандартов для количественной ПЦР (MIQE), не прошло и 20 лет с момента разработки метода. И многие (а среди форензик сайнтистс - большинство

) до сих пор плевать на эти стандарты хотели. Так что, если этот опыт со здравым смыслом не пересекается, зачем на него ссылаться?
Внешняя калибровка с одной стороны действительно могла бы помочь устранить эффект неравномерной эффективности ПЦР в определенном диапазоне концентраций, с другой - она реально может создать больше проблем, чем способна решить, потому ее использование не отменяет оптимизации мультиплекса по эффективности. Стандарты всегда разводят из хорошей ДНК, которой практически никогда не бывает в реальных образцах, особенно, криминологических. Примеси и деградация ДНК (в случае кДНК, еще и артефакты обратной транскрипции) легко способны исказить количественную оценку во многие разы. Если еще и эффективность не оптимальна, можно смело посылать описание мультиплекса в прогрессивный журнал, типа FSI: Genetics на горе тем, кто попытается его в реальной жизни применить
