[Алексей Гроссман]

Здравствуйте.
Пишу диплом на тему «оптимизация пробаподготовки для методики определения каннабиноидов волосах методом хромато-масс-спектрометрии». Для этого хотелось бы сравнить различные уже существующие методики. После долгих поисков. кроме этой forenschemist.narod.ru/Stat/Hair2000.htm, других не нашел, помогите с поиском пожалуйста. Так же просьба написать тем кто уже пробовал эту методику. Мною не было получено результатов по этой методике, хочу узнать какие у меня могли быть ошибки.

[KSS17]

Здравствуйте!
Очень интересный вопрос...
Только не обозначены предмет анализа, т.е. собственно что определять хотим и на чём мы это определять будем.
Понятие каннабиноиды и хромато-масс-спектрометрия понятия довольно растяжимые.

[D'ng]

Здравствуйте.
В дополнение к вопросам ув. KSS17
Не обозначены не только предметы анализа , но и цели работы в целом.
Качественное определение без привязки ко времени приема определяемого препарата (про количественное определение я скромно не спрашиваю)?

Мною не было получено результатов по этой методике, хочу узнать какие у меня могли быть ошибки.

А что вы конкретно делали и что конкретно у вас не получилось?

[Deminolog]

Количка чего?) Нативные вещества? Если ГХ определение - коэффициент по метилстеарату для ТГК = 1, это в метод рекомендациях еще 95 г. было)
Я так понял, что определение в волосах. Ну могу только посоветовать зайти на ScienceDirect, Wiley online library и Springerlink для начала и там уже посмотреть Есть великолепные журналы: Forensic Science, Forensic Science International, Drug testing & analysis, в которых эта тема уже наверняка не один раз поднималась, поэтому перед тем, как приступать к задаче - посмотрите там

[Алексей Гроссман]

Внимание надо акцентировать на «оптимизация пробаподготовки для методики определения каннабиноидов волосах методом хромато-масс-спектрометрии». На сейчас мы можем определить ТГК (тетрогидроканнабинол) и КНБ (каннабинол), используя ГХ-МС Agilent 5960 . Пробаподготовка заключается в очистке образцов, гидролизе, экстракции и дериватизации. Вопросы на эту тему освещены в Е.А. Симонов, Б.Н. Изотов, А.В. Фесенко «Наркотики: методы анализа на коже, в её придатках и выделениях».М.: «Анахарсис», 2000.—130 с. Там же приведен список литературы, только вот достать эту литературу сложно даже в электроном виде. За ссылки на журналы спасибо, обязательно посмотрю.

И по поводу того что я конкретно делал, выполнял указания по методике (для полного описания понадобится 3-4 страницы А4) используя волосы курильщика марихуаны, параллельно проводя исследование по нашей методике. В первом случае не было обнаружено ТГК-метил и КНБ-метил, во втором получены хорошие пики интенсивность 1200 ед по иону 328 (ТГК-метил) и 600 ед по иону 324 (КНБ-метил). Времена удерживания не пишу так как они различаются от условий проведения съемки (скорость газа-носителя, температура и т.д.) Анализируя свою работу могу только указать что при доведении pH до 2 перед экстракцией образовался белый осадок (предположительно денатурированные белки волос ) и появился характерный запах сероводорода. При дериватизации не было заметно характерного окрашивания в желто-коричневый цвет.

[Deminolog]

Насчет белка, подозреваю, что правильный вывод Соглашусь с этим Вы в скане работаете, как я понимаю (что разумно, Вы же не количкой сейчас занимаетесь, как я понимаю). Если знаете, какие именно соединения ищите - переходите в СИМ. Кроме того, я бы посоветовал использовать еще ВЭЖХ-МС. О тандемной масс-спектрометрии не говорю, этих приборов в стране не так много, хоть они и есть.
Тенденция развития сейчас такова, что метаболиты предпочитают смотреть на ВЭЖХ-МС и ВЭЖХ-МС/МС. Если такой прибор имеется - попробуйте на нем снять пробу. Причем чувствую, что интерес будет представлять негатив, а не традиционный позитив.
Если такой возможности нет - попробуйте задействовать ТФЭ. Посадить на патрон, а затем высушить в токе азота, чтобы избавиться от большей части воды, сделать смыв ацетонитрилом или ацетоном (у него элюирующая сила выше, если взять патрон С18. Только не увлекайтесь ацетоном-то...). Потом дериватизация или сразу в хромасс по вкусу. При наличии жидкостного хроматографа контролировать проскок анализом элюата, если же его нет - реэкстрация, допустим, в хлороформ и опять же - в хромасс. Убиваете много зайцев сразу с точки зрения аналитики.
Вообще я Вам немного завидую, сам бы с огромным удовольствием поработал над подобными темами, благо имею великолепный приборный парк и желание сделать нормальную, нужную работу, но не имею образцов

Сообщение отредактировал Deminolog - 12.03.2012 - 19:36

[Алексей Гроссман]

Спасибо за предложенную методику. Вот только из всей аппаратуры у нас есть ГХ-МС Agilent 6850 (в прошлый раз написал не правильно, прошу меня извинить). Снимаю в SIM-е.

[KSS17]

Здравствуйте!
Оптимизация методики подразумевает наличие такой методики...
Из того, что мне известно в плане определения каннабиноидов в волосах, выскажу свое мнение, сформированное от части на подходах и опыте зарубежных коллег.
Исследование волос на указанные соединения целесообразно разделить на два этапа.
Первый определение нативных каннабиноидов.
Второй определение основного метаболита ТГК, т.е. ТГК кислоты.

Первый этап худо бедно обычной ГХ-МС осуществим.
Второй, без МС-МС делать бессмысленно, вследствие очень низких концентраций аналита.

От указанной в первом посте методики, направленной на определение ТГК кислоты, мы давно отказались именно по причине отсутствия технической возможности.
Определение проводим только нативных каннабиноидов, качественно. Мы адаптировали методику, предложенную Pascal Kintz, на гугле-книги Вы можете найти и его книгу Analytical and Practical Aspects of Drug Testing in Hair.

Вы почти на верном пути, если речь идет только о нативных каннабиноидах.
Надо отказаться от подкисления после гидролиза образца, сделаете поймете о чем я.
Заменить метилирование на использование фторорганических дериватизационных агентов или на BSTFA. Чувствительность по фторорганике много выше, чем для метильных производных, отсюда и предел обнаружения снижается. Ну и методику, конечно, строить имеет смысл с использованием селективного ионного мониторинга.