[Leschka new]

Здравствуйте всем!
Помогите, пожалуйста новичкам ХТЛовским! Бьемся второй год (почти третий) с каннабиноидами. К большому сожалению только своими силами (NO средств, NO информации, NO опыта). Методика Савчука не идет, токситубы А+В эффекта не дали, дериватизация с BSTFA - результат тот же. Режимы меняли, но... в ответ тишина. TDx, бывает, дает более 1000.
Кому не жалко, кто чем может...
Agilent 6850.

[KSS17]

Здравствуйте!
Я вот не знаю методики Савчука... Простите за серость.
Но надо как минимум полностью описать ход исследования, чтоб можно было понять где и как "не идет".
Тубы токси-лаб это прекрасно, но не увидел и не услышал, а был ли гидролиз щелочной.
Как дериватизировали с БСТФА и в чем пробу вводили в ГХ/МС.
И т.д., и т.д.

[Deminolog]

Добрый день!
Поддерживаю. Вполне вероятно, что не зная специфики дериватизации Вы допустили гидролиз БСТФА, например. Поэтому, пожалуйста, опишите процедуру, включая используемые растворители.

[Leschka new]

опишите процедуру, включая используемые растворители.

К сожалению наизусть не воспроизведу, боюсь ошибиться. В ближайшее время все представлю с удовольствием. Спасибо за неотказ.

[Leschka new]

[quote все представлю с удовольствием .[/quote]
Здравствуйте! Приносим извинения за долгое молчание - авральчик присутствовал!
I способ
Щелочной гидролиз:
В чистую токси-тубу 5 мл мочи+ 50% КОН ≈по 30 мкл до рН 8, закрываем крышкой.
Точно 20 мин при 700С.
Остудить до комнатной температуры.
Экстракция:
+ ≈ 70 мкл НСl конц. до рН 1-2 + 2,0 мл хлористого метилена, 10 мин. На орбитальном шейкере. Центрифугируем 10-15 мин. При 3000 об/мин. Отбираем органический слой в чистую токси-тубу, выпариваем досуха в вакуумной установке без нагревания.
Дериватизация:
+ 50 мкл BSTFA, закрываем крышкой и на 10-15 мин. При 60-700С. Переносим в виалу и закалываем 1 мкл. Перед пробой дважды закалываем чистым BSTFA (промывка).
Характеристические ионы: 488, 473, 371.
ГХ/МС-исследование.
Газовый хроматограф Agilent 6850 с масс-селективным детектором 5957С. Капиллярная колонка HP-5MS 30 м х 250мкм х 0,25 мкм. Скорость потока газа-носителя – гелия – 1 мл/мин, с делением потока (10мл/мин-?), температура колонки: начальная – 100 С (3 мин), нагрев до 300 0 С со скоростью 25 0С/мин, температура инжектора – 280 0 С, температура интерфейса 280 0С. Режим работы МСД – полное сканирование от 40 до 550 а.е.м. Идентификация по библиотеке NIST.


II способ
Щелочной гидролиз:
В чистую токси-тубу 5 мл мочи+ 10% КОН ≈ 500 мкл до рН 8-9, закрываем крышкой.
Точно 15 мин при 600С.
Остудить до комнатной температуры.
Экстракция:
+ ≈ 500 мкл НСl конц. до рН 2-3 дважды отмываем по 2,0 мл гексана (10 мин. на орбитальном шейкере. Центрифугируем 10-15 мин. при 3000 об/мин). Отбираем нижний органический слой в чистую токси-тубу, выпариваем досуха в вакуумной установке без нагревания. Растворяем в 100 мкл этилацетата и закалываем 1 мкл.


III способ:
Щелочной гидролиз:
В чистую токси-тубу 3 мл мочи+ 5н NaОН, закрываем крышкой.
Точно 20 мин при 500С.
Остудить до комнатной температуры.
Экстракция:
+ НСl конц. до рН 2-3 + 3,0 мл смеси изооктан:этилацетат 7:1., 3 мин. на орбитальном шейкере. Центрифугируем 3-5 мин. при 3000 об/мин. Отбираем верхний органический слой в чистую токси-тубу, добавляем 30 мкл р-ра ВС дифениламина в ацетонитриле конц. 20 мкг/мл, выпариваем досуха в вакуумной установке без нагревания.
Дериватизация:
+ 50 мкл РFРA и 20 мкл PFPOH, закрываем крышкой и на 15 мин. при 900С. + 70 мкл этилацетата. Переносим в виалу и закалываем 1 мкл.
ГХ/МС-исследование.
Газовый хроматограф Agilent 6850 с масс-селективным детектором 5957С. Капиллярная колонка HP-5MS 30 м х 250мкм х 0,25 мкм. Скорость потока газа-носителя – гелия – 1 мл/мин, с делением потока (10мл/мин-?), температура колонки: начальная – 100 С (1 мин), нагрев до 300 0 С со скоростью 35 0С/мин (15 мин.). Режим работы МСД – полное сканирование от 41 до 650 а.е.м. Идентификация по библиотеке NIST

[Deminolog]

После фразы "дважды вкалываем чистый БСТФА" волосы на голове встали дыбом. Кто Вам сказал делать такое???

[Leschka new]

Кто Вам сказал делать такое???

Давно практикующие коллеги. Вроде бы сами так делают. Но почитав в форуме о дериватизации, что-то у самих закрались некоторые страшные мысли о продолжительности жизни колонки... Ищем выход. Пока на развилке...

[макsим]

все просто! сначала щелочной гидролиз как вы делаете, потом подкисляете и экстрагируйте дважды смесью гексан-этилацетат 7:1 миллилитра по 3, высушиваете и дереватизируете ДМСО 180мкл + ТМАН 20мкл и через пару минут 30мкл йодметана и оставляете при комнатной темперетуре минут на 20, затем экстрагируете гексаном и реконструируете этилацетатом 50мкл. и 1мкл в аппарат по вашей методе должно получиться. ионы 313, 357, 372.
И если хотите промыть колонку вколите какого нибудь растворителя ОХЧешного хотябы.

[Sergei4]

Давно практикующие коллеги. Вроде бы сами так делают. Но почитав в форуме о дериватизации, что-то у самих закрались некоторые страшные мысли о продолжительности жизни колонки... Ищем выход. Пока на развилке...

Есть еще вариант метилирования (методика во вложении, у меня воспроизводилась великолепно) мне даже больше нравится чем ТМС.

Сообщение отредактировал Sergei4 - 6.02.2013 - 19:00

[alexlp]

можно взглянуть на хроматограммы?

[hot_assay]

pH 8 - не маловато?
честно говоря, не задавался вопросом, хорошо это или плохо, но мы для гидролиза защелачиваем сильнее (примерно 5 мл мочи + 1 мл 10% KOH).
и гидролиз - 95 градусов 1 час.

[Leschka new]

можно взглянуть на хроматограммы?

Выйду на работу, попробую выложить - новички - всё впервые...

pH 8 - не маловато?
.

Будем пробовать. Спасибо!

ВСЕМ БОЛЬШОЕ СПАСИБО!!! Будем пытаться. А вот что посоветуете с библиотекой? Даёт ли NIST идентификацию производных ТГК?

[KSS17]

Здравствуйте!
Не нужны Вам библиотеки. Определение ТГК кислоты это целевой анализ и режим работы МСД надо настраивать на конкретное определяемое вещество. Т.е. работаем в режиме селективного ионного мониторинга.

[Leschka new]

Здравствуйте всем неравнодушным!
Если получилось, то вот хроматограмма:  0366_SCHAMOJAN_JAROS__2011__06_21.zip ( 968.25 килобайт ) Кол-во скачиваний:  884

Возможно, в ней и НИЧЕГО.

[KSS17]

Здравствуйте!
Всё получилось чудесным образом.
Ваш пик 19,37 m/z 371, 473, 488.