[5-ая]

Всем доброго дня! Собираемся определить содержание метгемоглобина в крови и субдуральной гематоме. До этого не делали. Нашли цианидный метод: иммется таблица, где очень коротко описан ход определения. Нам не ясно: 1. ацетонциангидрин и кристаллики феррицианида калия добавляем последовательно в одну и ту же кювету?2. Как гематому обрабатываем? Гематому растираем в ступке, центрифугируем и оттуда забираем (надосадочную жидкость) необходимое количество? Нам хотелось бы узнать как другие делают?

[chemist-sib]

И Вам - доброго времени суток, коллега! Да, все реактивы добавляются в одну и ту же кювету с исследуемым раствором; первоначальный отсчет D при 630 нм, затем - капля 10% ацетонциангидрина, перемешать и через 3 минуты - новый отсчет при той же длине волны, затем - несколько кристалликов красной кровяной соли и вновь через 3 минуты - отсчет D при 540 нм. Мы делаем по два параллельных определения каждого объекта - это не трудно, но на душе - поспокойнее. По поводу гематомы: более-менее среднюю пробу сгустка (из разных ее участков) растираем в ступке пестиком (или во флаконе палочкой) с 0,01% водным раствором сапонина, можно добавлять немного предварительно промытого и прокаленного кварцевого песка, и лучше делать это на холоду (подержав все в морозилке), не усердствуя по времени - помятуя о лабильности метгемоглобина. Затем уже слить с остатков сгустка, взмутить в воде, добавить фосфатный буфер и открутить.
Успехов! (хотя и "мутное" это дело - трупья биохимия... )
ЗЫ: а если хотите почитать про метод чуток подробнее, чем просто краткая таблица - попробуйте поискать в сети следующие старинные книги:
Кушаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина. М.:Медицина, 1968, 326 с.
Биохимические методы исследования в клинике. Справочник /под ред. А.А.Покровского. М.:Медицина, 1969, 652 с.

[5-ая]

Огромное спасибо! Про сапонин в нашей методике вообще не написано. Да, необходимо прочитать Вами предложенные книги))

[chemist-sib]

Постараюсь завтра уточнить про сапонин - откуда "ноги растут" (в тех старых книжках про него не найдете - там все больше про нормальную, живую кровь). Первоначально отвечал Вам, открыв один из своих старых актов. Вроде бы, применение сапонина вполне логично - обеспечивает гемолиз эритроцитов, повышает концентрацию дериватов гемоглобина в растворе. Но ведь, с другой стороны, в трупьей крови (пусть даже и свернувшейся) и так должен пройти гемолиз, да и просто растирание с водой тоже гемолизирует - пусть и осмотически - клетки, тем более - с песочком. Так что - факультативно это все (ИМХО!).

[chemist-sib]

Уточнил: еще в конце 80-х наша тогдашняя биохимик привезла с курсов из Москвы эту методу подготовки гематомы для определения MtHb. Дословно из ее записей:
Навеску ткани (300-400 мг) растирают в ступке на холоду (+4 оС) с 0,1 М фосфатным буфером (рН 6,8). Количество буферного раствора добавляют с таким расчетом, чтобы в 1 мл гомогената находилось 50 мг содержимого гематомы. К 1 мл полученного гомогената добавляют 3 мл 0,01% раствора сапонина и оставляют на 10 минут для полного гемолиза эритроцитов. Затем добавляют 6 мл 0,1 М фосфатного буфера и центрифугируют в течение 15 минут при 7000 об./мин для удаления стром эритроцитов.
Успехов!

[5-ая]

Большое спасибо

[tanya200]

всем доброй ночи !!я пишу отчет по практике лаборанта химического анализа ,нигде не могу найти методики выполнения биохимических анализов ,помогите пожалуйста
[indent]

[D'ng]

tanya200
Бог в помощь. Пока не научитесь корректно ставить вопросы ответа не получите.
С Ув...