[ЕвгенийЙ]

Здравствуйте. Обращаюсь к профессионалам, т.к. сам уже не знаю...
Начал заниматься, будучи в аспирантуре, тимусом, и столкнулся с ситуацией, что препараты после проводки получаются "пересушенными", неоднократно корректировал нахождение в спиртах, хлороформах и парафинах, но воз и ныне там...
Ситуация осложняется ещё и тем, что эксперимент ставлю на крысах, и ткань ведёт себя иначе чем человеческая.
Привожу несколько вариантов из тех, что пробовал
1) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 2 часа. Далее спирт/хлороформ 2:1, 1:1, 1: 2 -- по 45 мин. Затем хлороформ 1-й и 2-й -- по 30 мин. Потом хлороформ/парафин -- 1 час. Далее парфины 1-й,2-й,3-й -- по 30 минут.

2) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 1 часу. Далее спирт/хлороформ 2:1, 1:1, 1: 2 -- по 30 мин. Затем хлороформ 1-й и 2-й -- по 20 мин. Потом хлороформ/парафин -- 45 мин. Далее парфины 1-й,2-й,3-й -- по 30 минут.

3) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 1 часу. Далее спирт/хлороформ 2:1, 1:1, 1: 2 -- по 20 мин. Затем хлороформ 1-й и 2-й -- по 20 мин. Потом хлороформ/парафин -- 30 мин. Далее парфины 1-й,2-й,3-й -- по 20 минут.

4) 50,60,70,80,90,96,100 спирты -- по 1 часу. Далее спирт/хлороформ 1:1 -- 20 мин. Затем хлороформ -- 20 мин. Потом хлороформ/парафин -- 20 мин. Далее парфины 1-й,2-й -- по 20 минут.

В итоге препараты получались вначале вообще как "сухарики", трескались и "высыпались" со стекла. А в последнем варианте картина была менее выражена, но, тем не менее, весь препарат потрескавшийся и "порванный"...

Фиксация препаратов производилась в р-ре нейтрального 10% формалина.

Уже не знаю что делать. Ещё уменьшать время нахождения по реактивам?..
Посоветуйте пожалуйста.

Сообщение отредактировал ЕвгенийЙ - 23.06.2016 - 10:52

[ЕвгенийЙ]

P.S.: заливка в блок производилась парафин:воск:каучук=20:5:1 смесью.

[доктор морфолог]

В итоге препараты получались вначале вообще как "сухарики", трескались и "высыпались" со стекла. А в последнем варианте картина была менее выражена, но, тем не менее, весь препарат потрескавшийся и "порванный"...

Одним словом, крошатся парафин?
Причина:
- слишком твердый
- медленно охлаждался при заливке
- низкая температура окружающей среды
- большой угол наклона ножа.
Устранение:
- подышать на парафиновый блок
- изменить наклон ножа
- перезалить обьект

[ЕвгенийЙ]

Я вероятно непонятно описал свою проблему.

Моя проблема в том, что не парафин крошится, он как раз достаточно пластичный из-за добавленного воска. Трескается сам препарат, при микроскопии видны разрывы в самой ткани. Есть подозрение, что я его в каком-то из реактивов передерживаю по времени. Но я не могу понять, то ли это спирты, то ли хлороформы, то ли в чём ещё проблема.

Я ещё грешил, что нож тупой. Пробовал одноразовыми лезвиями -- эффект тот же -- линейные разрывы ткани. Внешне выглядит как просто пересохла и потрескалась.

Сообщение отредактировал ЕвгенийЙ - 23.06.2016 - 15:06

[Надежда Ивановна]

В спиртах пересушиваете. Завтра на работе посмотрю схему проводки.

[доктор морфолог]

Пересушили на спиртах, нужно пробовать резать поместив на него кусочек льда( довели до обезвоживания). На пока такая версия остается.

Сообщение отредактировал доктор морфолог - 24.06.2016 - 06:59

[ЕвгенийЙ]

Спасибо большое за помощь.

[Надежда Ивановна]

Спасибо большое за помощь.

Простите, обещание относительно протокола проводки не выполнила, в понедельник обязательно пришлю протокол проводки специально для органов иммунной системы крыс и мышей.

[Медик]

в понедельник обязательно пришлю протокол проводки специально для органов иммунной системы крыс и мышей.

Схемы проводки органов иммун.системы курей у Вас случайно нет ?

[доктор морфолог]

Схемы проводки органов иммун.системы курей у Вас случайно нет ?

специально у нас нет пока м.б.ноухау у иных медицин?

[Надежда Ивановна]

Проводка для органов иммунной системы крыс и мышей. В нашей лаборатории данная проводка осуществляется в автомате карусельного типа, по сути, это автоматизированный тип ручной проводки.
С уважением Надежда Ивановна

Реактив Экспозиция Температура

70 % спирт 1 час комнатная
80% спирт 1 час комнатная
96 % спирт I 1 час комнатная
96 % спирт II 1 час комнатная
Абсолютный спирт I 1 час комнатная
Абсолютный спирт II 30 минут комнатная
Абсолютный спирт – хлороформ (1:1) 30 минут комнатная
Хлороформ I 1 час комнатная
Хлороформ II 1 час комнатная
Парафин I 1 час 58 ˚С
Парафин II 1 час 58 ˚С

Сообщение отредактировал Надежда Ивановна - 26.06.2016 - 13:54

[ЕвгенийЙ]

Спасибо большое за помощь, буду пробовать.

[ЕвгенийЙ]

Подскажите ещё пожалуйста: до проведения по батарее вы материал фиксировали в 10% формалине или в жидкости Буэна?

И может ли фиксация в формалине также быть причиной того, что тимус "пересушивается"?

[Надежда Ивановна]

материал фиксировали в 10% формалине или в жидкости Буэна? И может ли фиксация в формалине также быть причиной того, что тимус "пересушивается"?

Образцы тканей фиксируем в 10% нейтральной формалине, фиксация в формалине не является причиной пересушивания тканей.