[АМД]

Доброго времени суток!
Подскажите, кто нибудь использовал наборы QuECheRS Vetex Q для исследований трупного материала? Достаточно ли чистыми получаются извлечения для ГХМС исследования? Все ли наркотические, психотропные и лекарственные вещества извлекаются из органов? Стоит ли их покупать, стоят они достаточно дорого около 200 долларов за набор на 25 проб.

[АМД]

Если никто не пробовал, поделюсь тем, что получилось у нас.
Нам купили коробку 25штук для пробы метода. 5г гомогенизата органа помещаем в пробирку, добавляем 5мл ацетонитрила, экстрагируем в УЗ бане. центрифугируем, отделяем вытяжку, переносим в другую емкость. Извлечение визуально очень грязное, добавляем порошок для очистки и через несколько минут извлечением визуально чистое. далее по инструкции отбираем 1мл для метилирования и 1мл для ацетилирования и анализ ГХМС. Все очень быстро и красиво, НО на хроматограммах огромное количество грязи выходит громадными пиками. Для ГХМС метод не пригоден.
Это то, что получилось у нас. Я хотел узнать результаты из других лабораторий.
Для того, чтобы не выбрасывать осташиеся дорогие комплекты мы приспособились делать так: очищенное ацетонитрильное извлечение разбавляем в 4 раза 0,1н соляной кислотой, экстрагируем смесью гексан:этилацетат 3:1, получаем кислое извлечение. К водной фазе добавляем карбонат натрия и экстрагируем хлороформом - щелочное извлечение. Соответственно метилирование и ацетилирование. Эти извлечение достаточно чистые и извлекаются все вещества отлично.

[alexlp]

Если никто не пробовал, поделюсь тем, что получилось у нас.
...
Все очень быстро и красиво, НО на хроматограммах огромное количество грязи выходит громадными пиками. Для ГХМС метод не пригоден.
...

Методика скрининга лекарственных, наркотических веществ и пестицидов методом ГХ-МС из органов и тканей трупов по технологии QuECheRS+LabTox-LPD.
Челябинск, ГБУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», 2013, 9 с.
Методика разработана экспертами судебно-химического отделения ЧОБСМЭ, к.х.н. Мелентьевым А.Б. и Латышевой Г.А.

Сообщение отредактировал alexlp - 1.12.2018 - 20:33

[АМД]

Методика скрининга лекарственных, наркотических веществ и пестицидов методом ГХ-МС из органов и тканей трупов по технологии QuECheRS+LabTox-LPD.
Челябинск, ГБУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», 2013, 9 с.
Методика разработана экспертами судебно-химического отделения ЧОБСМЭ, к.х.н. Мелентьевым А.Б. и Латышевой Г.А.

Почти все, что написано в прилагаемых документах, есть в инструкции к набору. И экстракты ацетонитрилом до очистки и после очистки выглядят именно так, как на фото - чистые и прозрачные. Вот только реальная хроматограмма извлечения из печени набором имеет намного более "печальный" вид чем хроматограмма извлечения по Васильевой на фото.

[Korvet]

а какая именно грязб на гх-мс? липиды, или следы от полярщины всякой?

[АМД]

представлю 2 файла. На первом все по методике и проба без дериватизации. Хроматограмма Gel-EQ желудок без дериватизации из 1мл очищенногоэкстракта. Gel-EQ-Ac и Gel-EQ-Me соответственно ацетилирование и метилирование. И еще печень то же - Ре. Идентифицированы добавленные в пробу вещества.
На втором, экспертиза печень и желудок но уже проведено разбавление водой и экстракция Pe-Q-B-Me это печень-Кечерс-кислое извлечение-метилирование, Pe-Q-A-Ac печень-кечерс-щелочное извлечение- ацетилирование

[A58]

представлю 2 файла. На первом все по методике и проба без дериватизации. Хроматограмма Gel-EQ желудок без дериватизации из 1мл очищенногоэкстракта. Gel-EQ-Ac и Gel-EQ-Me соответственно ацетилирование и метилирование. И еще печень то же - Ре. Идентифицированы добавленные в пробу вещества.
На втором, экспертиза печень и желудок но уже проведено разбавление водой и экстракция Pe-Q-B-Me это печень-Кечерс-кислое извлечение-метилирование, Pe-Q-A-Ac печень-кечерс-щелочное извлечение- ацетилирование

Здраствуйте, уважаемый АМД!
Методика и наборы от Интерлаб (на 5 г) плохо работают на гнилостном материале.
Существуют другие наборы (LABTOX-LPD), которые разработаны специально для гнилостного материала и схема обработки после очистки в них несколько изменена. Мы используем их с 2016 г.
 _________Quechers_LABTOX_LPD.doc ( 72.5 килобайт ) Кол-во скачиваний:  413

 __________LAB_OX_LPD_2016.doc ( 34.5 килобайт ) Кол-во скачиваний:  351

Более подробно пишите в личку.
С уважением, A58.

Сообщение отредактировал KSS17 - 4.12.2018 - 13:30

[АМД]

Исследуемый мною материал был без гнилостных изменений, а самый свежий.

[АМД]

Здраствуйте, уважаемый АМД!
Методика и наборы от Интерлаб (на 5 г) плохо работают на гнилостном материале.
Существуют другие наборы (LABTOX-LPD), которые разработаны специально для гнилостного материала и схема обработки после очистки в них несколько изменена. Мы используем их с 2016 г.
 _________Quechers_LABTOX_LPD.doc ( 72.5 килобайт ) Кол-во скачиваний:  413

 __________LAB_OX_LPD_2016.doc ( 34.5 килобайт ) Кол-во скачиваний:  351

Более подробно пишите в личку.
С уважением, A58.

Спасибо Вам за модифицированную методику.

[A58]

Исследуемый мною материал был без гнилостных изменений, а самый свежий.

Но с большим количеством жира. То, что Вы видите на хроматограммах, это большие пики жирных кислот. В наборы LabTox входит компонент, осаждающий жирные кислоты, но работает он медленно Поэтому мы выдерживаем пробы с сорбентами ночь, а затем проводим дальнейшие процедуры. Вообще этот метод подготовки проб больше подходит для ВЭЖХ-МС, проба после очистки напрямую в хроматограф, без всякой дальнейшей канители.

Сообщение отредактировал A58 - 5.12.2018 - 07:44

[LisSB]

Но с большим количеством жира. То, что Вы видите на хроматограммах, это большие пики жирных кислот. В наборы LabTox входит компонент, осаждающий жирные кислоты, но работает он медленно Поэтому мы выдерживаем пробы с сорбентами ночь, а затем проводим дальнейшие процедуры. Вообще этот метод подготовки проб больше подходит для ВЭЖХ-МС, проба после очистки напрямую в хроматограф, без всякой дальнейшей канители.

Здравствуйте. А что это за компонент, осаждающий жирные кислоты?! Про сульфат магния входящий в набор знаю, про ионообменный или обращеннофазовый полимер говорите?! но как же тогда основные аналиты?! И кто фирма-производитель патронов, т.е. где основное производство?!

[Korvet]

Здравствуйте. А что это за компонент, осаждающий жирные кислоты?! Про сульфат магния входящий в набор знаю, про ионообменный или обращеннофазовый полимер говорите?! но как же тогда основные аналиты?! И кто фирма-производитель патронов, т.е. где основное производство?!

а в квечерсах не патроны, хоть по сути это ТФЭ,но там сорбент насыпают прямо в экстракт. потом выбрасывают просто вместе с грязью которую он затянет. Где их делают трудно сказать. мы покупали для баловства эти сорбенты, вне наборов а сами по себе...вроде написано US...

там в качестве сорбентов PSA (primary secondary amin) - штука для извлечения насколько я понял сахаров и ПОЛЯРНЫХ кислот. Не жирных. хотя частично и их наверное. и С18 насыпушка. Но поскольку экстракция происходит из ацетонитрила а не из воды, то нет повода бояться что туда сядет даже такая неполярная штука как тгк-кислота, может и сядет конечно но не большой процент. В основном туда уходит матерая неполярщина типа жиров, там всяких холестеринов и пр, ЖК в какой-то мере. Еще последнее время появился специальный сорбент для именно для ЖК, о котором насколько я понимаю и говорит уважаемый А58, с ним вроде как все должно быть в шоколоде. Им и отличаются наборы от интерлаба от наборов лабтеха...Но все хорошо в теории...
не знаю, мы взяли эту идею, но не используем дорогих сорбентов. сперва просто разбавляем кровушку водой 1\3. потом доб. а-нитрил, высаливаем солью сульфатом магния. потом а-нитрил экстрагируем гексаном...туда уходит много липидов, я проверял просто этот экстракт. там на самом деле полно жиров и ЖК. Аналиты прекрасно сохраняются в а-нитриле. Для лучше очистки можно перед экстракцией гексаном а-нитриьного слоя туда добавить немного воды, 5-10% тогда ЖК лучше "выталкиваются" в гексан. для ВЭЖХ практически идеальный экстракт.

Основная проблема в этом случае она именно для ГХ в том что там сохраняется много полярных соединений, да тех же солей, похорошему бы эти экстракты выпарить и перерастворить в чем-нить типа спирта или ХЛФ, но выпаривая а-нитрил да еще и со следами воды можно "разложить" многие аналиты,тот же морфин такого может не вынести...

[LisSB]

а в квечерсах не патроны, хоть по сути это ТФЭ,но там сорбент насыпают прямо в экстракт. потом выбрасывают просто вместе с грязью которую он затянет. Где их делают трудно сказать. мы покупали для баловства эти сорбенты, вне наборов а сами по себе...вроде написано US...

там в качестве сорбентов PSA (primary secondary amin) - штука для извлечения насколько я понял сахаров и ПОЛЯРНЫХ кислот. Не жирных. хотя частично и их наверное. и С18 насыпушка. Но поскольку экстракция происходит из ацетонитрила а не из воды, то нет повода бояться что туда сядет даже такая неполярная штука как тгк-кислота, может и сядет конечно но не большой процент. В основном туда уходит матерая неполярщина типа жиров, там всяких холестеринов и пр, ЖК в какой-то мере. Еще последнее время появился специальный сорбент для именно для ЖК, о котором насколько я понимаю и говорит уважаемый А58, с ним вроде как все должно быть в шоколоде. Им и отличаются наборы от интерлаба от наборов лабтеха...Но все хорошо в теории...
не знаю, мы взяли эту идею, но не используем дорогих сорбентов. сперва просто разбавляем кровушку водой 1\3. потом доб. а-нитрил, высаливаем солью сульфатом магния. потом а-нитрил экстрагируем гексаном...туда уходит много липидов, я проверял просто этот экстракт. там на самом деле полно жиров и ЖК. Аналиты прекрасно сохраняются в а-нитриле. Для лучше очистки можно перед экстракцией гексаном а-нитриьного слоя туда добавить немного воды, 5-10% тогда ЖК лучше "выталкиваются" в гексан. для ВЭЖХ практически идеальный экстракт.

Основная проблема в этом случае она именно для ГХ в том что там сохраняется много полярных соединений, да тех же солей, похорошему бы эти экстракты выпарить и перерастворить в чем-нить типа спирта или ХЛФ, но выпаривая а-нитрил да еще и со следами воды можно "разложить" многие аналиты,тот же морфин такого может не вынести...

Здравствуйте. Что могу сказать, стояла у нас тут задача как раз избавиться от жирных кислот для дальнейшего анализа ГХ/МС, так вот ни квэтчерс от Интерлаба не справился, ни имеющиеся в наличии патроны от фирмы Ватерс с двойной фазой (обращёнкой и ионообменной), с ацетонитрилом экстракты были почище, но выход был маленький, только ж-ж с реэкстракцией удалось добиться хоть более менее подходящих результатов, когда мы из конопляного масла, действующие вещества доставали, достали. А вторая задача была очистки инъекционного раствора пропофола для анализа. ЖК забивают колонки, и вот для таких сложных объектов как масло, где действующие вещества тоже липотропы, но в следовых количествах, это актуально, поэтому и поинтересовалась.

[Korvet]

ну не, ну вот чтоб чисто из масел извлекать какие-то крохотные кол-ва аналита это конечно не пойдет...это как детским совочком ямы копать...у всего есть свое предназначение...для плоти я думаю вполне годится особенно если ВЭЖХ. для гх еще доработать надо...мне так кажется...

[LisSB]

ну не, ну вот чтоб чисто из масел извлекать какие-то крохотные кол-ва аналита это конечно не пойдет...это как детским совочком ямы копать...у всего есть свое предназначение...для плоти я думаю вполне годится особенно если ВЭЖХ. для гх еще доработать надо...мне так кажется...

Но квэтчерс вначале и разрабатывался для определения пестицидов (следов) в пищевых продуктах, а для трупного материала его просто адаптировали Верно для Вэжх только МС, хотя для данного метода и мини подготовку можно использовать в виде планшетов. Но у нас пока повсеместно ГХ и поэтому интерес был именно для ГХ/МС. Что предложите со своей стороны, как избавляться от ЖК, если искомые аналиты липотропы.