при выделении из волос кроме протеиназы что используете в качестве лизируещего компонента?
Цитата(Lady @ 2.11.2012 - 21:11)
Добрый вечер.
Использую Челекс при работе со слабо насыщенными или мизерными пятнами крови и выделений, волос. Поскольку, применяя смолу, ДНК не очищается в достаточной степени от белковых и иных примесей, ингибирующих амплификацию, а также потому, что сама смола обладает сильными ингибирующими свойствами, провожу очистку полученного препарата ДНК на кварцевой колонке (ДНК и так мало, не дай Бог потерять драгоценный препарат!). По этим же причинам отказываюсь от выделения из сильно красящихся объектов (напр., джинсовой ткани), земли. Из опробованных методов этот понравился больше всего "на выходе" именно при работе с вышеназванными биообъектами. С хорошо насыщенными пятнами предпочитаю работать другим методом.
Иногда делаю исключения и очистку колонками не провожу, например, из неспермальной фракции на тампонах с содержимым потерпевшей (при большом количестве материала от нее). В этом случае ДНК переношу в чистую пробирку и ПЦР ставлю в обязательном порядке на следующий день (не забывая центрифугировать перед этим).
На Ваш третий вопрос мне тоже в свое время все по-разному ответили, в литературе ответа не нашла. Пришлось экспериментировать: результат получается лучше, когда отделяешь ДНК от смолы.
ЗЫ Все написала, исходя из личного опыта и наблюдений в лаборатории "на гелях".