Доброго времени суток! Коллеги, возник вопрос касательно настройки параметров для метода ВЭЖХ-МС/МС, а именно - dwell time и loop (cycles) time
Метод mrm имеет 42 события в каждом событии регистрируется 3 продукт-иона. Некоторые события частично перекрываются. Как оптимально настроить эти параметры?
ВЭЖХ-МС/МС
Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Аналитическая и судебная токсикология
Здравствуйте!
Это Вам к коллеге Deminolog, он на этой приборной базе не одну собаку съел.
Цитата(Ex-SDS @ 13.03.2023 - 20:06) 
Доброго времени суток! Коллеги, возник вопрос касательно настройки параметров для метода ВЭЖХ-МС/МС, а именно - dwell time и loop (cycles) time
Метод mrm имеет 42 события в каждом событии регистрируется 3 продукт-иона. Некоторые события частично перекрываются. Как оптимально настроить эти параметры?
Метод mrm имеет 42 события в каждом событии регистрируется 3 продукт-иона. Некоторые события частично перекрываются. Как оптимально настроить эти параметры?
Это Вам к коллеге Deminolog, он на этой приборной базе не одну собаку съел.
Здравствуйте! Простите, я очень редко последнее время появляюсь тут :-( Проще всего мне в мессенджеры стучать сразу))
Dwell time - это время сканирования либо конкретного перехода, либо всех переходов, попадающих в один интервал сканирования. Вероятно, в Вашем случае Loop (cycle) time - это как раз время сканирования всех переходов в заданном временном интервале.
Если я правильно предположил, то проще всего настроить cycle time. Обычно я ставлю 0.3-0.4 секунды, а дальше прибор делит это время на количество переходов, идущих в один момент.
ВАЖНО! Используйте сканирование по расписанию. Мониторить все 42 соединения по 3 перехода (итого - 126 переходов) всю хроматограмму на трипл-кваде - бессмысленно, Вы же знаете их времена удерживания, вот и расставьте окна сканирования с шириной на 10 секунд превышающей начало и окончание пика. Т.е. если у Вас экстремум пика - 4.6 мин (например), начало пика - 4.5, а окончание - 4.7, то чтобы не пропустить пик ставим окно сканирования соединения 4.4-4.8. Тогда минорные отклонения параметров удерживания не повлияют на корректность съемки :-)
Также при сканировании по расписанию время сканирования каждого MRM-перехода становится внятным, что значительно повышает чутье прибора. Т.е. если у Вас прибор все время будет сканировать 126 переходов с временем цикла 0.3 сек, то каждый переход будет сканироваться чуть меньше 2 мс, это плохо. А если у Вас в один момент времени он мониторит только 3-6 переходов, то и время сканирования будет 50-100 мс, а это уже очень хорошо :-)
Надеюсь, не слишком сумбурно объяснил :-)
Dwell time - это время сканирования либо конкретного перехода, либо всех переходов, попадающих в один интервал сканирования. Вероятно, в Вашем случае Loop (cycle) time - это как раз время сканирования всех переходов в заданном временном интервале.
Если я правильно предположил, то проще всего настроить cycle time. Обычно я ставлю 0.3-0.4 секунды, а дальше прибор делит это время на количество переходов, идущих в один момент.
ВАЖНО! Используйте сканирование по расписанию. Мониторить все 42 соединения по 3 перехода (итого - 126 переходов) всю хроматограмму на трипл-кваде - бессмысленно, Вы же знаете их времена удерживания, вот и расставьте окна сканирования с шириной на 10 секунд превышающей начало и окончание пика. Т.е. если у Вас экстремум пика - 4.6 мин (например), начало пика - 4.5, а окончание - 4.7, то чтобы не пропустить пик ставим окно сканирования соединения 4.4-4.8. Тогда минорные отклонения параметров удерживания не повлияют на корректность съемки :-)
Также при сканировании по расписанию время сканирования каждого MRM-перехода становится внятным, что значительно повышает чутье прибора. Т.е. если у Вас прибор все время будет сканировать 126 переходов с временем цикла 0.3 сек, то каждый переход будет сканироваться чуть меньше 2 мс, это плохо. А если у Вас в один момент времени он мониторит только 3-6 переходов, то и время сканирования будет 50-100 мс, а это уже очень хорошо :-)
Надеюсь, не слишком сумбурно объяснил :-)
Доброго времени суток! Благодарю! Оставляю результаты своих поисков, может будет полезно. Если есть неточности, прошу указать на них.
В руководстве пользователя Shimadzu 8060. Установка времени регистрации сигнала (Dwell Time) Установить желаемую величину времени цикла измерения (loop time). При выборе величины времени цикла измерения следует исходить из предполагаемой средней величины ширины хроматографических пиков целевых (определяемых соединений) и задать ее равной приблизительно 1/20 от средней ширины пиков. Времена регистрации сигнала (Dwell Time) будут автоматически рассчитаны для каждого MRM-перехода, исходя из величины loop time и количества событий.
При этом, на события, где окна сканирования не перекрываются, Dwell Time больше. А где есть наложения событий, значение Dwell Time низкое. Т.е. надо добиваться хроматографического разделения аналитов.
При ручном расчете оптимальное значение Dwell Time (в секундах) ведут по формуле:
Dwell Time = pw / (n * mpx) - pt
pw - ширина пика, сек.
n - точек на пик. (10-20 точек. Так, в DIN EN 15662:2018 указано - не менее 10)
mpx - количество переходов
pt - время паузы (зависит от прибора, на Shimadzu 8060 - минимальное 1 мs, при смене полярности 5 ms)
Цитата
Если я правильно предположил, то проще всего настроить cycle time. Обычно я ставлю 0.3-0.4 секунды, а дальше прибор делит это время на количество переходов, идущих в один момент
В руководстве пользователя Shimadzu 8060. Установка времени регистрации сигнала (Dwell Time) Установить желаемую величину времени цикла измерения (loop time). При выборе величины времени цикла измерения следует исходить из предполагаемой средней величины ширины хроматографических пиков целевых (определяемых соединений) и задать ее равной приблизительно 1/20 от средней ширины пиков. Времена регистрации сигнала (Dwell Time) будут автоматически рассчитаны для каждого MRM-перехода, исходя из величины loop time и количества событий.
При этом, на события, где окна сканирования не перекрываются, Dwell Time больше. А где есть наложения событий, значение Dwell Time низкое. Т.е. надо добиваться хроматографического разделения аналитов.
При ручном расчете оптимальное значение Dwell Time (в секундах) ведут по формуле:
Dwell Time = pw / (n * mpx) - pt
pw - ширина пика, сек.
n - точек на пик. (10-20 точек. Так, в DIN EN 15662:2018 указано - не менее 10)
mpx - количество переходов
pt - время паузы (зависит от прибора, на Shimadzu 8060 - минимальное 1 мs, при смене полярности 5 ms)
Добрый день) Значит, все правильно понял, loop time = scan time.
1 мс - это, увы, больше маркетинг, также, как и 5 мс. Перекинуть полярность трипл квад реально может за 20-50 мс. Там нужно сначала снять все нарпяжения с линз, потом приложить новые... Да и работать на единицах мс не стоит, если хотите нормальные результаты получать :-)
1 мс - это, увы, больше маркетинг, также, как и 5 мс. Перекинуть полярность трипл квад реально может за 20-50 мс. Там нужно сначала снять все нарпяжения с линз, потом приложить новые... Да и работать на единицах мс не стоит, если хотите нормальные результаты получать :-)