набор QuECheRS

Полная версия: набор QuECheRS


Форум судебных медиков России > Судебная медицина и судебно-медицинская экспертиза > Аналитическая и судебная токсикология
АМД
Доброго времени суток!
Подскажите, кто нибудь использовал наборы QuECheRS Vetex Q для исследований трупного материала? Достаточно ли чистыми получаются извлечения для ГХМС исследования? Все ли наркотические, психотропные и лекарственные вещества извлекаются из органов? Стоит ли их покупать, стоят они достаточно дорого около 200 долларов за набор на 25 проб.


АМД
Если никто не пробовал, поделюсь тем, что получилось у нас.
Нам купили коробку 25штук для пробы метода. 5г гомогенизата органа помещаем в пробирку, добавляем 5мл ацетонитрила, экстрагируем в УЗ бане. центрифугируем, отделяем вытяжку, переносим в другую емкость. Извлечение визуально очень грязное, добавляем порошок для очистки и через несколько минут извлечением визуально чистое. далее по инструкции отбираем 1мл для метилирования и 1мл для ацетилирования и анализ ГХМС. Все очень быстро и красиво, НО на хроматограммах огромное количество грязи выходит громадными пиками. Для ГХМС метод не пригоден.
Это то, что получилось у нас. Я хотел узнать результаты из других лабораторий.
Для того, чтобы не выбрасывать осташиеся дорогие комплекты мы приспособились делать так: очищенное ацетонитрильное извлечение разбавляем в 4 раза 0,1н соляной кислотой, экстрагируем смесью гексан:этилацетат 3:1, получаем кислое извлечение. К водной фазе добавляем карбонат натрия и экстрагируем хлороформом - щелочное извлечение. Соответственно метилирование и ацетилирование. Эти извлечение достаточно чистые и извлекаются все вещества отлично.


alexlp
Цитата(АМД @ 1.12.2018 - 01:20)
Если никто не пробовал, поделюсь тем, что получилось у нас.
...
Все очень быстро и красиво, НО на хроматограммах огромное количество грязи выходит громадными пиками. Для ГХМС метод не пригоден.
...


Методика скрининга лекарственных, наркотических веществ и пестицидов методом ГХ-МС из органов и тканей трупов по технологии QuECheRS+LabTox-LPD.
Челябинск, ГБУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», 2013, 9 с.
Методика разработана экспертами судебно-химического отделения ЧОБСМЭ, к.х.н. Мелентьевым А.Б. и Латышевой Г.А.


АМД
Цитата(alexlp @ 1.12.2018 - 20:29)
Методика скрининга лекарственных, наркотических веществ и пестицидов методом ГХ-МС из органов и тканей трупов по технологии QuECheRS+LabTox-LPD.
Челябинск, ГБУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», 2013, 9 с.
Методика разработана экспертами судебно-химического отделения ЧОБСМЭ, к.х.н. Мелентьевым А.Б. и Латышевой Г.А.


Почти все, что написано в прилагаемых документах, есть в инструкции к набору. И экстракты ацетонитрилом до очистки и после очистки выглядят именно так, как на фото - чистые и прозрачные. Вот только реальная хроматограмма извлечения из печени набором имеет намного более "печальный" вид чем хроматограмма извлечения по Васильевой на фото.


Korvet
а какая именно грязб на гх-мс? липиды, или следы от полярщины всякой?


АМД
представлю 2 файла. На первом все по методике и проба без дериватизации. Хроматограмма Gel-EQ желудок без дериватизации из 1мл очищенногоэкстракта. Gel-EQ-Ac и Gel-EQ-Me соответственно ацетилирование и метилирование. И еще печень то же - Ре. Идентифицированы добавленные в пробу вещества.
На втором, экспертиза печень и желудок но уже проведено разбавление водой и экстракция Pe-Q-B-Me это печень-Кечерс-кислое извлечение-метилирование, Pe-Q-A-Ac печень-кечерс-щелочное извлечение- ацетилирование


A58
Цитата(АМД @ 2.12.2018 - 22:40)
представлю 2 файла. На первом все по методике и проба без дериватизации. Хроматограмма Gel-EQ желудок без дериватизации из 1мл очищенногоэкстракта. Gel-EQ-Ac и Gel-EQ-Me соответственно ацетилирование и метилирование. И еще печень то же - Ре. Идентифицированы добавленные в пробу вещества.
На втором, экспертиза печень и желудок но уже проведено разбавление водой и экстракция Pe-Q-B-Me это печень-Кечерс-кислое извлечение-метилирование, Pe-Q-A-Ac печень-кечерс-щелочное извлечение- ацетилирование

Здраствуйте, уважаемый АМД!
Методика и наборы от Интерлаб (на 5 г) плохо работают на гнилостном материале.
Существуют другие наборы (LABTOX-LPD), которые разработаны специально для гнилостного материала и схема обработки после очистки в них несколько изменена. Мы используем их с 2016 г.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Более подробно пишите в личку.
С уважением, A58.


АМД
Исследуемый мною материал был без гнилостных изменений, а самый свежий.


АМД
Цитата(A58 @ 4.12.2018 - 07:49)
Здраствуйте, уважаемый АМД!
Методика и наборы от Интерлаб (на 5 г) плохо работают на гнилостном материале.
Существуют другие наборы (LABTOX-LPD), которые разработаны специально для гнилостного материала и схема обработки после очистки в них несколько изменена. Мы используем их с 2016 г.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Более подробно пишите в личку.
С уважением, A58.


Спасибо Вам за модифицированную методику.


A58
Цитата(АМД @ 4.12.2018 - 22:15)
Исследуемый мною материал был без гнилостных изменений, а самый свежий.

Но с большим количеством жира. То, что Вы видите на хроматограммах, это большие пики жирных кислот. В наборы LabTox входит компонент, осаждающий жирные кислоты, но работает он медленно Поэтому мы выдерживаем пробы с сорбентами ночь, а затем проводим дальнейшие процедуры. Вообще этот метод подготовки проб больше подходит для ВЭЖХ-МС, проба после очистки напрямую в хроматограф, без всякой дальнейшей канители.


LisSB
Цитата(A58 @ 5.12.2018 - 07:42)
Но с большим количеством жира. То, что Вы видите на хроматограммах, это большие пики жирных кислот. В наборы LabTox входит компонент, осаждающий жирные кислоты, но работает он медленно Поэтому мы выдерживаем пробы с сорбентами ночь, а затем проводим дальнейшие процедуры. Вообще этот метод подготовки проб больше подходит для ВЭЖХ-МС, проба после очистки напрямую в хроматограф, без всякой дальнейшей канители.

Здравствуйте. А что это за компонент, осаждающий жирные кислоты?! Про сульфат магния входящий в набор знаю, про ионообменный или обращеннофазовый полимер говорите?! но как же тогда основные аналиты?! И кто фирма-производитель патронов, т.е. где основное производство?!


Korvet
Цитата(LisSB @ 5.12.2018 - 19:29)
Здравствуйте. А что это за компонент, осаждающий жирные кислоты?! Про сульфат магния входящий в набор знаю, про ионообменный или обращеннофазовый полимер говорите?! но как же тогда основные аналиты?! И кто фирма-производитель патронов, т.е. где основное производство?!


а в квечерсах не патроны, хоть по сути это ТФЭ,но там сорбент насыпают прямо в экстракт. потом выбрасывают просто вместе с грязью которую он затянет. Где их делают трудно сказать. мы покупали для баловства эти сорбенты, вне наборов а сами по себе...вроде написано US...

там в качестве сорбентов PSA (primary secondary amin) - штука для извлечения насколько я понял сахаров и ПОЛЯРНЫХ кислот. Не жирных. хотя частично и их наверное. и С18 насыпушка. Но поскольку экстракция происходит из ацетонитрила а не из воды, то нет повода бояться что туда сядет даже такая неполярная штука как тгк-кислота, может и сядет конечно но не большой процент. В основном туда уходит матерая неполярщина типа жиров, там всяких холестеринов и пр, ЖК в какой-то мере. Еще последнее время появился специальный сорбент для именно для ЖК, о котором насколько я понимаю и говорит уважаемый А58, с ним вроде как все должно быть в шоколоде. Им и отличаются наборы от интерлаба от наборов лабтеха...Но все хорошо в теории...
не знаю, мы взяли эту идею, но не используем дорогих сорбентов. сперва просто разбавляем кровушку водой 1\3. потом доб. а-нитрил, высаливаем солью сульфатом магния. потом а-нитрил экстрагируем гексаном...туда уходит много липидов, я проверял просто этот экстракт. там на самом деле полно жиров и ЖК. Аналиты прекрасно сохраняются в а-нитриле. Для лучше очистки можно перед экстракцией гексаном а-нитриьного слоя туда добавить немного воды, 5-10% тогда ЖК лучше "выталкиваются" в гексан. для ВЭЖХ практически идеальный экстракт.

Основная проблема в этом случае она именно для ГХ в том что там сохраняется много полярных соединений, да тех же солей, похорошему бы эти экстракты выпарить и перерастворить в чем-нить типа спирта или ХЛФ, но выпаривая а-нитрил да еще и со следами воды можно "разложить" многие аналиты,тот же морфин такого может не вынести...


LisSB
Цитата(Korvet @ 15.12.2018 - 12:07)
а в квечерсах не патроны, хоть по сути это ТФЭ,но там сорбент насыпают прямо в экстракт. потом выбрасывают просто вместе с грязью которую он затянет. Где их делают трудно сказать. мы покупали для баловства эти сорбенты, вне наборов а сами по себе...вроде написано US...

там в качестве сорбентов PSA (primary secondary amin) - штука для извлечения насколько я понял сахаров и ПОЛЯРНЫХ кислот. Не жирных. хотя частично и их наверное. и С18 насыпушка. Но поскольку экстракция происходит из ацетонитрила а не из воды, то нет повода бояться что туда сядет даже такая неполярная штука как тгк-кислота, может и сядет конечно но не большой процент. В основном туда уходит матерая неполярщина типа жиров, там всяких холестеринов и пр, ЖК в какой-то мере. Еще последнее время появился специальный сорбент для именно для ЖК, о котором насколько я понимаю и говорит уважаемый А58, с ним вроде как все должно быть в шоколоде. Им и отличаются наборы от интерлаба от наборов лабтеха...Но все хорошо в теории...
не знаю, мы взяли эту идею, но не используем дорогих сорбентов. сперва просто разбавляем кровушку водой 1\3. потом доб. а-нитрил, высаливаем солью сульфатом магния. потом а-нитрил экстрагируем гексаном...туда уходит много липидов, я проверял просто этот экстракт. там на самом деле полно жиров и ЖК. Аналиты прекрасно сохраняются в а-нитриле. Для лучше очистки можно перед экстракцией гексаном а-нитриьного слоя туда добавить немного воды, 5-10% тогда ЖК лучше "выталкиваются" в гексан. для ВЭЖХ практически идеальный экстракт.

Основная проблема в этом случае она именно для ГХ в том что там сохраняется много полярных соединений, да тех же солей, похорошему бы эти экстракты выпарить и перерастворить в чем-нить типа спирта или ХЛФ, но выпаривая а-нитрил да еще и со следами воды можно "разложить" многие аналиты,тот же морфин такого может не вынести...

Здравствуйте. Что могу сказать, стояла у нас тут задача как раз избавиться от жирных кислот для дальнейшего анализа ГХ/МС, так вот ни квэтчерс от Интерлаба не справился, ни имеющиеся в наличии патроны от фирмы Ватерс с двойной фазой (обращёнкой и ионообменной), с ацетонитрилом экстракты были почище, но выход был маленький, только ж-ж с реэкстракцией удалось добиться хоть более менее подходящих результатов, когда мы из конопляного масла, действующие вещества доставали, достали. А вторая задача была очистки инъекционного раствора пропофола для анализа. ЖК забивают колонки, и вот для таких сложных объектов как масло, где действующие вещества тоже липотропы, но в следовых количествах, это актуально, поэтому и поинтересовалась.


Korvet
ну не, ну вот чтоб чисто из масел извлекать какие-то крохотные кол-ва аналита это конечно не пойдет...это как детским совочком ямы копать...у всего есть свое предназначение...для плоти я думаю вполне годится особенно если ВЭЖХ. для гх еще доработать надо...мне так кажется...


LisSB
Цитата(Korvet @ 16.12.2018 - 13:46)
ну не, ну вот чтоб чисто из масел извлекать какие-то крохотные кол-ва аналита это конечно не пойдет...это как детским совочком ямы копать...у всего есть свое предназначение...для плоти я думаю вполне годится особенно если ВЭЖХ. для гх еще доработать надо...мне так кажется...


Но квэтчерс вначале и разрабатывался для определения пестицидов (следов) в пищевых продуктах, а для трупного материала его просто адаптировали biggrin.gif Верно для Вэжх только МС, хотя для данного метода и мини подготовку можно использовать в виде планшетов. Но у нас пока повсеместно ГХ и поэтому интерес был именно для ГХ/МС. Что предложите со своей стороны, как избавляться от ЖК, если искомые аналиты липотропы. smile.gif


Korvet
для фруктов, овощей, круп, мяса, сначало было придумано, понятно что где мясо там и трупный материал, можно подтянуть, ну уж никак не для матриц сплошь состоящих из жира...можно было и не пытаться...

что я предложу? о, моя самая любимая брутальная пробоподготвка для жиров - это когда гексановый экстракт встряхивают с конц. серной кислотой...не для всего подходит, так что конкретизируйте вопрос


LisSB
Цитата(Korvet @ 17.12.2018 - 05:08)
для фруктов, овощей, круп, мяса, сначало было придумано, понятно что где мясо там и трупный материал, можно подтянуть, ну уж никак не для матриц сплошь состоящих из жира...можно было и не пытаться...

что я предложу? о, моя самая любимая брутальная пробоподготвка для жиров - это когда гексановый экстракт встряхивают с конц. серной кислотой...не для всего подходит, так что конкретизируйте вопрос


Появились капсулы с конопляным маслом -БАДы, доказать или опровергнуть в них наличие действующих контролируемых веществ из каннабиса biggrin.gif


alexlp
Цитата(LisSB @ 18.12.2018 - 00:39)
Появились капсулы с конопляным маслом -БАДы, доказать или опровергнуть в них наличие действующих контролируемых веществ из каннабиса biggrin.gif

Омылять не пробовали?


LisSB
Цитата(alexlp @ 17.12.2018 - 22:46)
Омылять не пробовали?
Как раз и омыляли, а потом реэкстракция, но все равно грязновато...


Korvet
а какая именно грязь? если примеси карб. кислот, то просто на конечной стадии сделайте ТМС (или метил), они перейдут в летучую форму, ТГК поймаете в виде ТМС эфира. КОнечно пики будут, но они не будут мешать, можно же просто выключение детектора на этом месте сделать.

Ведь грязь есть мешающая типа сами ЖК или моно, ди, триглицериды, они трудно летучи и собой и своими продуктами распада загрязняют систему попросту. ну и сами пики тянучие. а если МЭЖК, то это не и грязь вовсе, и они никак не влияют на общий хром. процесс. Так что нужна ли вообще тотальная очистка - большой вопрос.


Korvet
я бы попробовал так: масло растворить в гексане, и из него сделать экстракцию а-нитрилом. Остаток а-нитрила выпарить и обработать метанольным раствором HCl (метилирование ЖК и заодно метанолиз глицеридов), потом добавить гексан и водную щелочь для нейтрализации, взболтать и колоть гексановый слой.

что надо проверить: коэфициент распределения ТГК между гексаном и а-нитрилом (доп. эксперимент), я думаю он будет неплохим, и не разрушиться ли ТГК от спиртового р-ра хлороводорода, но я думаю не должен


LisSB
Цитата(Korvet @ 18.12.2018 - 08:03)
я бы попробовал так: масло растворить в гексане, и из него сделать экстракцию а-нитрилом. Остаток а-нитрила выпарить и обработать метанольным раствором HCl (метилирование ЖК и заодно метанолиз глицеридов), потом добавить гексан и водную щелочь для нейтрализации, взболтать и колоть гексановый слой.

что надо проверить: коэфициент распределения ТГК между гексаном и а-нитрилом (доп. эксперимент), я думаю он будет неплохим, и не разрушиться ли ТГК от спиртового р-ра хлороводорода, но я думаю не должен


Мы от такой системы отказались ещё летом, по программе АСD-LAB распределение будет преимущественно в гексане, а учитывая следы веществ это будут существенные потери, относительно сильных кислот и щелочей Вы правы, но могу сказать подщелоченная обработка с последующим заколом в ВЭЖХ/МС с ионной ловушкой дала неплохие результаты, приличный ТГК (но конечно это к наркотическим сортам не относится) в капсулах российского производства, а вот в английских нет ничего, сегодня перепроверим. А вообще этот показатель можно использовать как оценку качества продукции, 100 % масло конопляное первичного холодного отжима или оно разбодяжено тем же льняным или каким другим маслом или просто отходы biggrin.gif. Сейчас контрольные группы принимают внутрь капсулы, чистое масло, вот тогда встанет вопрос ещё посмотреть метаболиты. Эх, были бы стандарты, вообще можно было соотношение количеств посмотреть, но мы же не там, а здесь. Интересно так, у них (Англия) на капсулах даже пишутся интервалы содержания омега-кислот, а у наших нет и объёмом они меньше, но зато указывается, что могут использоваться для профилактики и лечения хронических бронхолегочных заболеваний, типа отказывайтесь от курения ребята cool.gif


Korvet
ну так то по программе...это же в теории, а как мы знаем в органической химии у явлений плохо развито чувство долга: должно быть так,а получается порой иначе wink.gif у меня получался из кровушки ТГК (но правда кислота, он же полярнее!) после гексановой чистки...интересно проверить....не очень понял как Вы в итоге делали? поделитесь если не секрет wink.gif


LisSB
Цитата(Korvet @ 19.12.2018 - 13:21)
ну так то по программе...это же в теории, а как мы знаем в органической химии у явлений плохо развито чувство долга: должно быть так,а получается порой иначе wink.gif у меня получался из кровушки ТГК (но правда кислота, он же полярнее!) после гексановой чистки...интересно проверить....не очень понял как Вы в итоге делали? поделитесь если не секрет wink.gif

Скоро все отпишу в блоге подробно и статью готовим smile.gif Но теперь однозначно могу сказать, наши капсулы лучше!!! полезнее!!! так как доказательно содержат часть природного биокомплекса биологических веществ стимулирующего свойства, хоть и в низких количествах, обладающих противовоспалительными, антиоксидантными, противогрибковыми свойствами, да еще и холестерин снижают!!! А природный биокомплекс это не "химия", совокупное содержание различных веществ приводит к более заметному фармакологическому оздоровительному (!!!) эффекту даже при низких количествах biggrin.gif Депрессии уж точно не будет, да и до эйфории дело не дойдет, хоть запейся, хотя... если только "желудок" не захочет посмотреть, кто же там такой "умный" cool.gif


Korvet
Цитата(Korvet @ 19.12.2018 - 13:21)
ну так то по программе...это же в теории, а как мы знаем в органической химии у явлений плохо развито чувство долга: должно быть так,а получается порой иначе wink.gif



итак эксперимент. берем раст.вещество, делаем экстракт в гексане, потом добавляем 1\1ацетонитрил по объему,и взбалтываем. рез-ты ниже...так что все не так плохо как показывают рассчеты...

условия ГХ: делитель 1\10, 250 изотерма, испаритель 280

как видно более полярный каннабидиол вообще полностью уходит из гексана...


Русская версия Invision Power Board © 2001-2021 Invision Power Services, Inc.

© 2002-2015 Форум судебных медиков
При копировании материалов сайта размещение активной ссылки на источник обязательно!