Установление половой принадлежности

Доброго времени суток!
Хочу кратко изложить возможности молекулярно-генетической экспертизы при установлении половой принадлежности различных объектов и её преимущества перед традиционными цитологическими методами.
Какие биологические объекты могут быть исследованы:
- следы крови, в том числе подвергшиеся гнилостному разложению, замытые и мельчайшие брызги;
- следы слюны (окурки сигарет, почтовые марки и конверты, шапки-маски, жевательные резинки);
- следы пота на одежде и обуви, рукоятках различных предметов;
- следы спермы;
- различные ткани и органы человека, в том числе гистологические препараты;
- кости, зубы, ногти;
- волосы, как корневая часть, так и стержень.

Многое, конечно, зависит от материала, степени его сохранности, но по сотням экспертиз в год выход (+) около 95-98%. Цитология даёт в лучшем случае 5-10% положительных результатов.
Используются участки на X- и Y-хромосомах человека гена амелогенина. Мы применяем наиболее короткий - 106 и 112 пар оснований нуклеотидов. Пример установления половой принадлежности ряда объектов приводится.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Две полосы - мужской генетический пол, одна полоса (106 пар оснований нуклеотидов) - женский пол.

Мы применяем установление половой принадлежности, как целостную экспертизу, довольно часто. И это в большой степени повышает качество экспертиз выходящих из бюро судебно-медицинской экспертизы.
Знаю, что в других местах, где есть генетика - такие экспертизы редко проводятся, не на потоке.
Что этому мешает?
Если возникнут вопросы по самой методике, по алгоритму проведения такой экспертизы и по тому, как максимально удешевить такое исследование - готов поделиться подробностями.

Уважаемый Зубр, Вы из стержня волоса выделяете ядерную ДНК для определения пола по Амелогенину? Это не опечатка? Тогда мои поздравления.

Уважаемый 'Genetik'! Вы серьёзно полагаете, что в стержне волоса напрочь отсутствует ядерная ДНК? Ваша ирония и поздравления указывает именно на это. Есть несколько статей по поводу типирования STR и амелогенина (он даже попроще, чем STR) в стержнях волос. Приведу, например, тезисы с 21 конгресса общества судебных генетиков (ISFG).
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
И ещё с Промеговской конфепенции.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Всех благ.

Уважаемый Зубр! Тезисы - это конечно все очень здорово. Однако если Вы (или кто-то другой) возьмете волос и отделите от него кореневую часть с 2 см стержнем, то в оставшемся стержне Вы наврядли найдете что-то похложее на ядерную ДНК (я более чем уверен что вообще не найдете яДНК). В особенности это касается волос с места происшествия, а если они еще и полежат на природе месяцок-другой, тогда уж в стержне не то, что с ядерной ДНК, с митохондриалкой могут быть проблемы. Так что если у кого и получается типировать яДНК из стержня, пусть в начале проверит не контаминация ли это. А по поводу опубликованных тезисов, как говаривал Остап :"Контора пишет".
Всем привет

Уважаемый 'Genetik'! Есть, и надо отметить немало, статей в уважаемых научных журналах, где авторы получают результаты генотипирования, работая со стержнем волоса. Когда окажутся под рукой полные тексты статей - обязательно размещу их на форуме. Приведу пока абстракты.
Нажмите для просмотра прикрепленного файлаНажмите для просмотра прикрепленного файла
Слава Богу, по поводу тезисов Остап ничего не говорил . Здесь лучше подойдёт народная мудрость: никогда не говори - никогда . А вообще-то, если месяцок-другой и следы крови полежат на природе, да ещё под ярким солнышком, перемежающимся с дождиком, то и в них ядерной ДНК будет не найти.
Всего наилучшего.

Уважаемый Зубр! Уважаемые научные журналы - это очень хорошо. Мы там тоже периодически засвечиваемся. Однако хочу заметить, что McNevin и сотаварищи (эти ребята - авторы одной из прикрепленной Вами статьи) брали ни много, ни мало, а 100 (!) мг волосьевых стержней. Я представляю себе картину: парикмахерская на месте преступления. При этом щедрый преступник аккуратно посыпает место происшествия горстью своих подстриженных волос (не меньше 100 мг, а лучше целый грамм - что-там мелочиться, не у всех же современное молекулярно-генетическое оборудование), чтобы эксперт мог, не мучаясь, протипировать яДНК. Брр! Правда такая ситуация возможна только в наших снах или в парикмахерских. Я в своей практике еще не встречал ни одного (!) человека, кто бы мог выделить и протипировать ядерную ДНК (контаминация не в счет) из стержня одного волоса. А уж я сколько их родненьких потипировал. Из луковицы - пожалуйста, а стержень - извиняйте только митохондриалка! Объясните мне простому генетику, может я конечно заблуждаюсь, но откуда в стержне взялась ядерная ДНК? Вот этого я никак не могу понять. Только чур килограммы волос не в счет.
Спасибо за внимание!

Да, чуть не забыл. Может кто-нибудь поделится своим опытом выделения и типирования ядерной ДНК из стержня волоса человека? Буду очень признателен!

Доброго времени суток, уважаемые коллеги!
Информацию по дефектам в областях прикрепления праймеров при установлении половой принадлежности (амелогенин) продолжу выкладывать в данной теме, так как она ближе по смыслу, чем тема о личном экспертном опыте.
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Нажмите для просмотра прикрепленного файла
Всем привет.

0.23% ошибок определения пола по амелогенину - для Индии. Интересно, а для России подобная статистика есть?

Индия - загадочная страна, но всё же приведённый Вами процент кажется чрезмерно высоким. Откуда эти данные, приведите первоисточник, хотя бы ссылку.

Данные по Индии - из первой приведенной Вами статьи в предыдущем посте.

Уважаемая 'Claudia'!

Извиняюсь, погорячился. Таких работ на российской популяции не встречал. Для европы - эта величина на порядок ниже. Тем не менее, величина значимая. Выход в анализе (дополнительном) с другими праймерами на тот же участок или какой-нибудь Y-STR.
Всем привет.

Здравствуйте, Ув. Зубр.
Напишите, пожалуйста, что за участки ДНК размером 80, 100, 200 и 300 п.о.н. видны у Вас в ПААГе? У меня тоже подобные отрезки имели место быть.

Это маркер (размерный стандарт) молекулярных весов. Это отдельная проба, которая вносится пользователем для контроля молекулярного веса анализируемых проб.

Уважаемый Зубр.
Раз вернулись к старой теме,поясните пожалуйста.
Что понимается под "гистологическим препаратом" (окрашенный срез ткани на предметном стекле,залит полистиролом или пихтовым бальзамом,накрыт покровным стеклом)?
Что лучше для исслед-я?Гистологический стекло-препарат или парафиновый блок с кусочком органа, проведённого через гист.батарею?

ясно. у нас ставится леддэр с контролем XX. видимо, у меня неспецифика полезла, а, может, и животное какое...

Контроль. в данном виде исследования, должен быть чуть более разносторонним. Кроме ХХ должен быть нанесён и ХУ, само собой - отрицательный тоже. Слово леддер здесь не к месту, так как аллели всего две. То есть, мужской пол и есть леддер.
удачи.

Уважаемый 'медик'!

Лучше для исследования - парафиновый блок. Стекла тоже могут быть исользованы, но процент успеха значительно меньший. Кроме того, некоторые краски препятствуют анализу ДНК (об этом было подробно, посмотрите в архивах форума). Конечно, и в блоках не всегда всё успешно пройдёт. Причин несколько: прежде всего исходное состояние трупа, следующее - сколько и в какой концентрации были ткани в формалине (при какой температуре хранились в формалине), ну и главная - владение экспериментатора теорией и практикой работы с непростыми пробами ДНК.
Удачи и хорошего дня.

Вас понял.Большое спасибо.

[quote name='Зубр' date='1.09.2012 - 09:51' post='153850']Контроль. в данном виде исследования, должен быть чуть более разносторонним. Кроме ХХ должен быть нанесён и ХУ, само собой - отрицательный тоже. Слово леддер здесь не к месту, так как аллели всего две. То есть, мужской пол и есть леддер.
удачи.

Извините, очепяталсь, XY. В том то и дело! я тоже не понимаю, почему леддер для Amel состоит из нескольких аллелей, ведь их всего две! Надо будет поинтересоваться у производителя.

Добрый день! Потому что производитель, скорее всего, присылает леддер LPL-локуса, им удобно пользоваться и отдельный леддер "собирать" не надо

Добрый вечер!
Точно!!! Вы знали! тогда вопрос: зачем производитель обращает наше внимание на то, что Amel проходит 1/2 геля, а LPL 1 гель? можно же поставить Amel с LPL, раз длина одинаковая? или нет?

Доброе утро! Sone4ka, LPL гонится 2/3 геля, а вот если в дуплексе с F13B - тогда 1 гель, что бы последний локус разогнать. Amel я всегда гоню 2/3 геля, мне так удобнее и аллели больше расходятся, так что можете, смело поставить Amel с монолокусом LPL и гнать 2/3 геля.
Всего доброго.

в инструкции написано, что и монолокусный, и диплексный LPL бегут 1 гель. но раз у Вас так все замечательно получается, то и я попробую, действительно, так удобнее Спасибо большое! Вы самый разумный разум во Вселенной!

Да не за что, всегда рад помочь

Дамы и господа СМЭ,
У меня есть предложение, как кардинально расширить применение тестирования генетического пола в российской суд-мед практике.
Первое, все малоимущие суд-мед генетические лаборатории скидываются по 1 тысячи рублей из зарплаты сотрудников.
Второе, на собранные средства синтезируются праймеры для генотипирования соответствующего фрагмента амелогенина (рекомендую обратиться с этим вопросом в Евроген). Последовательность праймеров можно взять на сайте STRBase. http://www.cstl.nist.gov/div831/strbase/PP16primers.htm .
Третье, праймеров хватит на всех (миллионы тестов). Праймеры почестному поделить.
Четвертое, другие компоненты ПЦР каждый может купить у ответственных отечественных производителей, например Диалат ЛТД.
Пятое, да здравствует поголовное генетичнское тестирование пола по всей Руси.

Зачем? мы и с этими наборами пол замечательно определяем?

Ответ скрыт в названии этого топика.

Уважаемые коллеги, почему определение пола обязательно сводится к электрофорезу? RealTime PCR быстрее, дешевле, чувствительнее и надежнее. К тому же выбор доступных пол-специфичных мишеней для этого метода шире. Например локус SRY гораздо надежнее амелогенина, поскольку формирование мужского фенотипа определяется присутствием в геноме именно этого локуса (даже при отсутствии в кариотипе Y хромосомы). Есть какие-то причины быть привязанными к электрофорезу или это просто дань традиции?

В развитие этого замечания предлагаю заодно смотреть микроделеции AZF-региона Y-хромосомы. Тогда в заключении можно, например, писать, что у подозреваемого имеется полная делеция AZFb региона, сопровождающаяся олигоспермией.

Да мы бы с радостью отошли от форезов! Все дело в финансовом обеспечении со стороны департаментов здравоохранения. Мы даже денег на рН-метр не можем добиться, работаем с лакмусовыми бумажками не говоря уже о канцтоварах, которые за свой счет частенько покупаются во многих учреждениях. Наши бюрошные отделения генетики в своем большинстве выглядят скорее как дань моде, а не как необходимость современности.

Это весьма странно, если посмотреть что делается в генетических лабораториях аналогичного профиля других ведомств - СК, МО, МВД. Из достоверных источников мне известно, что лаборатория СК в Москве оснащена автоматами Текан для пробоподготовки, автоматами Инвитроген для экстракции ДНК, амплификаторами Эпплайд, 3500 секвенаторами и еще много чем. Сейчас создается такая же СК лаборатория в Екатеринбурге и, возможно, в других местах. МО выделило большие средства на развитие своих генетических лабораторий, в МВД примерно такая же картина. Я думаю, что еще 2-3 года и в СМЭ просто никому не придет в голову направлять этот вид экспертиз. И обсуждать проблемы ПААГ на СМЭ форуме будет эксклюзивной экзотикой.

Я с Вами согласна полностью. Если сейчас не модернизироваться, то конец будет печален и именно через данный промежуток времени в моем регионе. От нас уже "ушла" не одна экспертиза.

Насчет модернизироваться мне кажется, что наверху уже давно решили, что СМЭ легко обойдется без нелепых завитушек в виде генетической экспертизы и ещё веселее займется своим прямым делом - резьбой, пилением и т.п.